Automatizace toxikologických testů

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Klára Žižková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace toxikologických testů Cílem této práce bylo najít vhodnou metodu stanovení luciferázy I. a II. typu pomocí metody sekvenční injekční analýzy a optimalizovat podmínky stanovení. Hlavním cílem bylo automatizovat analýzu v sériích vzorků připravených v rámci testování různých látek, které mohou ovlivnit zejména hladinu sekretované luciferázy (II. typ) při interakci buněk s testovanými látkami v toxikologických studiích. V teoretické části je popsána luminiscence, její typy a využití. Dále jsou zmíněny typy luciferáz a činidla, se kterými probíhá chemická reakce. Jsou popsány principy průtokových technik. Byla provedena rešerše na dané téma - stanovení luciferázy. Měření byla prováděna za pomoci metody sekvenční injekční analýzy. V experimentální práci byly použity tři přístroje. Jeden průtokový injekční analyzátor, který pracuje na principu SIA a jeden sekvenční injekční analyzátor se dvěma způsoby detekce - detektor s neprůtokovou celou a s průtokovou spirální celou. Byla provedena optimalizace měření - zejména koncentrace a objem vzorků a činidel, pořadí jejich aspirace a také průtoková rychlost průchodu...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Klára Žižková Supervisor: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Automation of toxicology tests The aim of this diploma thesis was to find suitable method for determination of luciferase of the Ist and IInd types using the sequential injection method and optimize the assay conditions. The main aim was to automate analysis in a series of samples prepared for the testing of various substances, which, in particular, may affect the level of secreted luciferase (type II) upon the interaction of cells with tested substances in toxicological studies. The theoretical part describes luminescence, its types and applications. In addition, the types of luciferases and reagents with which a chemical reaction takes place are mentioned and principles of flow techniques are described. The review of luciferase determinations was carried out. Measurements were performed using the sequential injection method. Three instruments were used for the measurement. One flow injector analyser and one sequential injection analyser with two detection methods - batch-flow spiral detection cells were used. Measurement optimization was performed based on concentration and volume of samples and reagents,...