HPLC analýza ve vodě rozspustných vitaminů s využitím elektrochemického detektoru

Abstract

Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia je v súčastnosti cennou analytickou metódou často využívanou vo farmácii. Biotín je vo vode rozpustný vitamín, ktorý je dôležitou zložkou mnohých enzýmov, látok potrebných pri trávení a látkovej výmene. Podieľa sa taktiež na látkovej výmene cukrov, tukov a bielkovín. Nachádza sa v rôznych druhoch potravy, najmä v pečeni, arašidovom masle, vaječnom žĺtku, mrkve, hrachu, sóji, pšeničných klíčkoch a ovsených vločkách. Táto práca sa zaoberá optimalizáciou chromatografických podmienok na stanovenie biotínu. Jej cieľom je nájsť vhodnú mobilnú fázu, pri ktorej dochádza k najlepšej separácii biotínu od ostatných zložiek roztoku, nájsť vhodný vnútorný štandard a zostaviť hydrodynamické voltamogramy jednotlivých vo vode rozpustných vitamínov. Na stanovenie bol použitý coulometrický detektor Coulochem III. Analýza prebiehala na kolóne Lichrospher 60, RP - select B (240 x 4,0 mm i.d., 5 μm), od firmy Merck. Mobilná fáza na stanovenie biotínu bola v zložení kyselina octová : acetonitril (CH3COOH 0,2410 mol/l; pH 3,0) 85: 15. Prietoková rýchlosť bola nastavená na 1ml/min, pri teplote 30žC. Vložené napätie na pracovné elektródu bolo 900 mV, pri citlivosti 200 nA.

High performacne liquid chromatography is valued analytical method, which is one of the most frequently used in pharmacy. Biotine is at water soluble vitamin, which is an important element of various enzyme, stuff necessary in metabolism. It part take on metabolism of sugar, fat and protein. It occur in several sort of food, especially in roast, peanut butter, egg yolk, carrot, peas, soya, wheat gemmule and oaten flake. This work deals with optimalization chromatographic condition on determination of biotine. Its target is to find optimal mobile phase, near which give out best separation biotine from others element in solution, to find internal standard and form hydrodynamic voltamogramms, individual at water soluble vitamin. For determinatiom was used coulometric detector Coulochem III. Analysis overshoot on column Lichrospher 60, RP - select B (240 x 4,0 mm and.d., 5 em), Merck. Mobile phase was composed of acetic acid : acetonitrile (CH3COOH 0,2410 mol/l; pH 3,0) 85: 15. Flow rate was 1ml/min, in temperature 30žC. Current inserted on working electrode was 900 mV, sensitiveness 200mV.