Stanovení exprese genu PML-RARalpha na myším modelu akutní promyelocytární leukemie metodou RT-qPCR za použití RNA izolované z krve

Abstract

David Švec Stanovení exprese genu PML-RARα na myším modelu akutní promyelocytární leukemie metodou RT -qPCR za použití RNA izolované z krve. Abstrakt Metody kvantitativní PCR představují v současnosti jeden z nejcitlivějších způsobů stanovení genetických odchylek podmiňujících maligní onemocnění. Cílem diplomové práce bylo vypracování přesné, rychlé a dostupné metody pro sledování progrese akutní promyelocytární leukémie (APL) u modelu transgenní myši hMRP8-PMLRARα .K vypracování metody. stanovení změn exprese fúzního genu PML - RARα ( transkriptu bcr1) pro myší model jsme využili systému sledování polymerázové řetězové reakce používající reverzní transkriptázu (RT-qPCR) , v humanní medicíně využívané běžně při vyšetřování vzorků lidské kostní dřeně. PML - RARα transkripty jsou klíčovými znaky akutní promyelocytární leukémie (APL) s t(15,17) translokací. Pro sledování bcr1 transkriptů byla extrahována RNA z kostní dřeně, sleziny nebo malého objemu krve od imbredního kmene FVB/N za vybraných preparativních podmínek a ověřena její kvalita elektroforetickou migrací. V diplomové práci jsme představili metodu pro kvantifikaci t(15,17) transkriptu bcr1, který pocházel z myeloidních buněk transgenních myší a byl injikován do myší kmene FBV/N. Exprese PML - RARα transkriptů byla normalizována pomocí místního 18S...

Our goal was to develop an accurate, quick and affordable method for following up the progression of acute promyelocytic leucemia in murine model. We took advantage of a developed system of reverse transkriptase quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) performinng human bone marrow samples to develop a quantitative method of measurement of PML-RARalpha transcripts for murine model. PML-RARalpha transcripts are hallmarks of acute promyelocytic leucemia (APL) with t(15;17) translocation. For measuring bcr1 transcripts, RNA was isolated from murine blood. We present here a method for quantification of t(15;17) transcript bcr1, which is developed in myeloid cells of transgenic mice and then is injected into FVB/N mice. The expression of PML-RARalpha transcripts is normalized using the housekeeping 18S ribosomal subunit gene. We have quantitative data for three healthy mice (FVB/N) and for six ill mice (APL), which were injected 104, 103 or 102 blasts. We show negative expression in FVB/N mice and different copy numbers for APL mice. There is not shown a complete correlation between the amount of injected cells and the amount of transkript copies.