Homeostáza vnitrobuněčného pH v patogenních kvasinkách Candida albicans a Candida glabrata

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Lucie Winterová Školitel: Prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Konzultantky: RNDr. Marie Kodedová, Ph.D., RNDr. Hana Sychrová, DrSc. Název diplomové práce: Homeostáza vnitrobuněčného pH v patogenních kvasinkách Candida albicans a Candida glabrata Diplomová práce se věnuje studiu vlivu kultivačních podmínek na homeostázu vnitrobuněčného pH u kmenů kvasinek Candida albicans a Candida glabrata s delecemi membránových transportérů kationtů alkalických kovů Cacnh1Δ a Cgtrk1Δ. Hodnoty vnitrobuněčného pH byly měřeny pomocí pHluorinu, varianty zeleného fluorescenčního proteinu, exprimovaného v cytosolu buněk obou druhů kvasinek. Fluorescence exprimovaného pHluorinu byla ověřena pomocí fluorescenčního mikroskopu a byla stanovena závislost intenzity fluorescence pHluorinu na hodnotě vnitrobuněčného pH vytvořením kalibrační křivky. V rámci této diplomové práce byl zjištěn vliv složení kultivačního média (zejména různého zdroje dusíku) a vliv působení antimykotik (flukonazolu, klotrimazolu, amfotericinu B a terbinafinu) na hodnoty vnitrobuněčného pH obou kandid. Porovnáním s kontrolními kmeny byly zjištěny vlivy delecí Cacnh1Δ a Cgtrk1Δ na změny některých fyziologických parametrů, jako je schopnost a...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Lucie Winterová Supervisor: prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Consultants: RNDr. Marie Kodedová, Ph.D., RNDr. Hana Sychrová, DrSc. Title of diploma thesis: Intracellular pH homeostasis in pathogenic yeast Candida albicans and Candida glabrata The thesis examines the influence of culture conditions on intracellular pH homeostasis in Candida albicans and Candida glabrata yeast strains with deletions of alkali- metal-cation membrane transporters, Cacnh1Δ and Cgtrk1Δ. Intracellular pH was measured with the use of pHluorin: a variant of a green fluorescent protein which had been expressed in the cytosol of both yeast species. Fluorescence of the expressed pHluorin was confirmed by a fluorescence microscopy and a calibration curve was created to determine the dependence of fluorescence intensity of pHluorin on intracellular pH. This thesis further demonstrates impact of medium composition (especially different nitrogen sources) and antifungal agents (fluconazole, clotrimazole, amphotericin B and terbinafine) on intracellular pH values in both yeasts. The effects of Cacnh1Δ and Cgtrk1Δ mutations were established on certain physiological parameters, such as the growth speed under different culture...