UHPLC-MS/MS analýza vybraných léčiv v biologickém materiálu

Abstract

Dexrazoxane (DEX), a bisdioxopiperazine derivative, is the only clinically used drug effective against anthracycline-induced cardiotoxicity. First studies indicated that DEX is a pro-drug bioactivated in cardiomyocytes by enzymatic hydrolysis of piperazine rings to its active metabolite - ADR-925. However, further research revealed that effective cardioprotection induced by bisdioxopiperazine compounds is more likely related to topoisomerase IIβ depletion induced by DEX itself. The only bioanalytical method for simultaneous determination of DEX and its metabolite was developed using HPLC-MS/MS system. Nevertheless, the analysis requires 30 min for each run, which does not accomplish requirements for modern bioanalysis. The aim of this project is to develop and validate a fast UHPLC-MS/MS method for determination of DEX and ADR-925 in plasma. The analyses were performed using an UHPLC system coupled to triple quadrupole mass spectrometer with ESI source in positive ion mode (both Shimadzu). Following stationary phases were tested: ZORBAX Bonus-RP (100 mm × 3.0 mm, 1.8 μm), Luna Omega Polar C18 (100 mm × 2.1 mm, 1.6 μm) and Kinetex F5 column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm). Mixtures of acetonitrile or methanol with different concentrations of ammonium formate or formic acid were tested as mobile phase with...

Bisdioxopiperazinový derivát dexrazoxan (dále jen DEX) je jediné klinicky užívané léčivo proti kardiotoxicitě způsobené antracykliny. Prvotní studie přišla s myšlenkou, že DEX je proléčivo, které je v kardiomyocytech enzymatickou hydrolýzou piperazinového kruhu aktivováno na metabolit označovaný ADR-925. Nicméně další výzkum prokázal, že skutečným mechanismem účinku je deplece topoizomerázy IIβ způsobené samotným DEX. Za účelem detekce DEX a jeho metabolitu byla vyvinuta bioanalytická metoda na HPLC-MS/MS systému. Tato metoda trvá 30 minut, což je na požadavky moderních bioanalýzy poměrně dlouhá doba. Cílem tohoto projektu byla snaha vyvinout a validovat rychlejší metodu využívající UHPLC-MS/MS schopnou detekovat DEX a ADR-925 v plasmě. Veškerý vývoj probíhal na UHPLC systému ve spojení s hmotnostním spektrometrem s trojitým kvadrupólem s ESI ionizací v pozitivním módu (obojí Shimadzu). Jako stacionární fáze byly testovány ZORBAX Bonus-RP (100 mm × 3.0 mm, 1.8 μm), Luna Omega Polar C18 (100 mm × 2.1 mm, 1.6 μm) a Kinetex F5 column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm). Testované mobilní fáze byly směsi acetonitrilu či methanolu s různými koncentracemi mravenčanu amonného nebo kyselinou mravenčí při isokratické i gradientové eluci. Nejlepších výsledků bylo dosaženo na koloně Kinetex F5 s 1mM mravenčanem amonným...