Zavedení metody MST pro studium interakcí mezi biomolekulami

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Josef Krátký Supervisor: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Title of diploma thesis: Introduction of the MST method for the study of interactions between biomolecules MicroScale thermophoresis (MST) is currently a recognized method for studying interactions between biomolecules; the method is using directed movement of biomolecules in a temperature gradient, which allows to analyze practically all interactions where changes in analyte properties are possible. This thesis was focused on introduction of the MST method for research of protein interactions with low molecular weight substances focusing on verifying the possibility of using MST in monitoring the interaction of glutathione S-transferase (GST) with selected terpenes ((-)-fenchone, (-)-isopulegole, (+)-isomenthone, (-)-carvone, (+)-carvone, piperitone, and thujone). Another aim was to determinate the properties of terpenes by classical spectrofluorimetric methods and MST. Using spectrofluorimetric methods it was found that terpenes affect the fluorescence of human serum albumin, and they do not affect the fluorescence spectrum of the dye NHS, which is used as a dye for samples for MST. Next part of experimental work was to determine...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Josef Krátký Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení metody MST pro studium interakcí mezi biomolekulami Termoforéza v mikroměřítku (MST) je v současné době uznávanou metodou při studiu interakcí mezi biomolekulami, pomocí usměrněného pohybu biomolekul v teplotním gradientu je možné analyzovat prakticky jakékoliv interakce, kde dochází ke změně vlastností analytů. Tato práce byla zaměřena na zavedení metody pro studium interakcí proteinů s nízkomolekulárními látkami se zaměřením na ověření možnosti využití MST pro sledování interakce glutathion-S-transferasy (GST) s vybranými terpeny ((-)-fenchon, (-)-isopulegol, (+)-isomenthon, (-)-karvon, (+)-karvon, piperiton a thujon). Dalším cílem bylo stanovení vlastností terpenů pomocí klasických spektrofluorimetrických metod a MST. V práci bylo zjištěno spektrofluorimetrickými metodami, že terpeny ovlivňují fluorescenční spektra pro lidský sérový albumin a že neovlivňují fluorescenční spektrum pro barvivo NHS, které je využíváno pro přípravu vzorků pro MST. Dále byla v práci stanovena aktivita GST a bylo studováno její ovlivnění pomocí monoterpenů. GST po přidání terpenů vykazuje nižší aktivu. Metodou MST pak bylo zjištěno,...