Imunohistochemická analýza exprese endoglinu a adhezních molekul u experimentálního modelu NASH

Abstract

Nonalcoholic steatohepatitis (NASH) is an aggressive form of nonalcoholic fatty liver disease, which is characterized by liver inflammation and fibrosis. It was shown that membrane endoglin (ENG) participates on fibrosis and plasma concentrations of soluble endoglin were increased in patients with type II diabetes mellitus, and hypercholesterolemia. The purpose of this study was to analyze the expression of ENG, biomarker of fibrosis (αSMA/alpha smooth muscle actin), and biomarkers of inflammation (ICAM-1, VCAM-1) in liver in mice. Wild type mice were divided into two groups (n=8 in each group), control group was fed with chow diet and experimental/NASH group was fed with high fat diet with fructose and glucose in drinking water (NASH diet) for 6 months. Expression of selected proteins was evaluated by means of immunohistochemistry (ImmPRESSTM and VECTASTAIN® ELITE® ABC kit) on formalin-fixed, paraffin-embedded liver sections. The results of this study showed that the expression of VCAM-1 and ICAM-1 was detected in liver sinusoids and it was higher in NASH group. Similarly, we showed higher expression of ENG in NASH group in comparison with control. Moreover, αSMA was found not only in blood vessels, but also in hepatic stellate cells in NASH group compared to control suggesting fibrotic process...

Nealkoholová steatohepatitida (NASH) je agresivní forma tzv. nonalcoholic fatty liver disease neboli jaterních tukových chorob, která je charakterizována zánětem a fibrózou v játrech. Bylo prokázáno, že se endoglin (ENG) podílí na fibróze, a plazmatické koncentrace solubilního endoglinu jsou zvýšené u pacientů s diabetem mellitem II. typu a hypercholesterolémií. Cílem této studie bylo analyzovat expresi ENG, biomarkeru fibrózy (αSMA/alfa smooth muscle actin) a biomarkerů zánětu (ICAM-1, VCAM-1) u myších jater. Wild type myši byli rozděleny do dvou skupin (n=8 v každé skupině), kontrolní skupina byla krmena standardní dietou a experimentální/NASH skupina byla krmena vysokotukovou dietou s fruktózou a glukózou v pití (NASH dieta) po dobu 6 měsíců. Exprese vybraných proteinů byla hodnocena pomocí imunohistochemie (ImmPRESSTM a VECTASTAIN® ELITE® ABC kit) na jaterních řezech, které byly fixovány formalínem a zalité do parafínu. Výsledky této diplomové práce ukazují, že exprese VCAM-1 a ICAM-1 byla detekována v jaterních sinusoidách a byla výrazně vyšší v NASH skupině v porovnání s kontrolní skupinou. Podobně exprese ENG v NASH skupině byla vyšší. Dále αSMA byl detekován nejenom v krevních cévách, ale i v hvězdicovitých buňkách u NASH skupiny, což poukazuje na fibrotický proces po NASH dietě. Závěrem...