Study of deproteinization of milk samples via salting-out induced phase separation and automation by Lab-In-Syringe

Abstract

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Daniel Machián Supervisor: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Co-supervisor: PharmDr. Kateřina Fikarová, Ph.D. Diploma thesis title: Study of deproteinization of milk samples via salting-out induced phase separation and automation by Lab-In-Syringe A novel approach to sample deproteinization based on homogeneous liquid-liquid extraction with salting-out induced phase separation was explored. A methodology was developed, experimentally tested, and optimized that allows automated centrifuge-less deproteinization of milk samples using the flow-batch technique Lab-In-Syringe. As in other sample preparation methods, the aim was to eliminate the sample matrix and obtain an organic phase that could be submitted to analysis. The thesis includes a range of preliminary experiments performed offline, i.e. without the intended instrumentation, as well as optimization experiments performed online using a Lab-In-Syringe system. Salting out agents and three solvents were tested as well as phase ratios and operational parameters on the Lab-In-Syringe system, including system configuration. In the method optimized by the work reported in this thesis, milk proteins were found effectively denatured and...

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Daniel Machián Školitel: M.Sc. Burkhard Horstkotte, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Kateřina Fikarová, Ph.D. Název diplomové práce: Studie deproteinizace vzorků mléka pomocí fázové separace indukované vysolováním a automatizace v Lab-In-Syringe V této práci byl zkoumán nový přístup k deproteinizaci vzorku založený na homogenní kapalinové extrakci s vysolováním indukovanou fázovou separací. Byl vyvinut, experimentálně otestován a optimalizován postup, který umožňuje automatizovanou deproteinizaci vzorků mléka pomocí techniky Lab-In-Syringe, bez potřeby centrifugace. Stejně jako v jiných metodách přípravy vzorků bylo cílem eliminovat matrici vzorku a získat organickou fázi, která by mohla být podrobena analýze. Práce zahrnuje řadu předběžných experimentů prováděných offline, tj. bez zamýšleného instrumentace, jakož i optimalizační experimenty prováděné online pomocí systému Lab-In-Syringe. Byly testovány vysolovací činidla a tři rozpouštědla, stejně jako fázové poměry a provozní parametry systému Lab-In-Syringe, včetně jeho konfigurace. V metodě optimalizované postupy popsanými v této práci, bylo dosaženo účinné denaturace a vysrážení mléčných proteinů vodou mísitelným rozpouštědlem, acetonitrilem, který...