Stanovení cytostatik používaných v léčbě retinoblastomu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Abstract

The goal of this bachelor's thesis was to develop and validate a new method enabling detection of etoposide in plasma and the vitreous humour. Etoposide belongs to the roup of cytostatics used for retinoblastoma and other tumours treatment. It is possible to determine etoposide by high performance liquid chromatography, enzimoimmunoanalyticly, or by radioimmunoanalysis. Etoposide is tied in plasma up to 95% to plasmatic proteins, namely albumin, and that is why the drug dosage is low. Monitoring of the etoposide level enables more effective and safer possibilities of treatment. Etoposide is determined by high performance liquid chromatography with UV detection at 229 nm. During the evaluation of the method its accuracy, robustness, linearity and range and limit of detection was checked. The method was checked on 200 plasma and vitreous humour of rabbits. Calibrating curve is linear up to 80 μg/ml in plasma as well as in the vitreous humour. Variation coefficient regarding the repeatability, reproducibility and robustness was lower than 10%. It was found out that repeated de-freezing of the sample does not effect the etoposide determination. This method is suitable for determination of etoposide in vitreous humour and plasma. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout a validovat novou metodu umožňující stanovení etoposidu v plazmě a ve sklivci. Etoposid patří mezi cytostatika, která se užívají k léčbě retinoblastomu a jiných nádorů. Etoposid je možno stanovit pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie, enzymoimunoanalyticky nebo radioimunoanalýzou. Etoposid se v plazmě až z 95% váže na plazmatické bílkoviny, zejména na albumin a volná koncentrace léčebné dávky je proto nízká. Monitorování hladiny etoposidu umožňuje efektivnější a bezpečnější možnost léčby. Etoposid byl stanovován vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s UV detekcí při 229 nm. V průběhu vývoje metody byla zjišťována její přesnost, robustnost, inearita a rozsah a mez detekce. Metoda byla vyzkoušena na přibližně 200 vzorcích plazmy a sklivce králíků. Kalibrační křivka je lineární do 80 μg/ml a to jak v plazmě, tak i ve sklivci. Variační koeficient u opakovatelnosti, reprodukovatelnosti i robustnosti byl nižší než 10%. Bylo zjištěno, že opakované rozmrazování vzorku nemá na stanovení etoposidu žádný vliv. Tato metoda je vhodná pro stanovení etoposidu ve sklivci a v plazmě. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)