Vplyv kritického stavu pacientov na poškodenie DNA

Abstract

The first cases of patients with pneumonia which grew into an acute respiratory distress syndrome and caused breathing problems began to appear in December 2019. Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is the cause of a global pandemic and it is caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). A complex interplay of factors is responsible for the progression of the disease. Some studies suggest that it promotes oxidative stress and thus may lead to oxidative damage to cells and DNA. The purpose of this study was to observe the relationship between oxidative DNA damage and a critical condition caused by COVID-19 using a comet assay technique. The basic principle of the used method consists in fixation of lymphocytes in an agarose gel, removal of the membrane and cytoplasm of cells, incubation with specific enzymes and electrophoresis. In the process of electrophoresis, negatively charged DNA fragments migrates towards the anode and the cell thus acquires the typical shape of a comet. Comets are visualized using the DNA intercalation dye ethidium bromide. We quantified single - strand breaks and oxidized pyrimidines and purines by using specific enzymes (modification of the method for detecting specific lesions). Results are reported as % tail DNA, thus the percentage of DNA in the...

V decembri 2019 sa začali objavovať prvé prípady pacientov s pneumóniou, ktorá prerástla v syndróm akútnej respiračnej tiesne a spôsobovala problémy s dýchaním. Koronavírusová choroba 2019 (COVID-19) je príčinou globálnej pandémie a spôsobuje ju závažný akútny respiračný syndróm koronavírus 2 (SARS-CoV-2). Za progresiu ochorenia je zodpovedná komplexná súhra faktorov. Niektoré štúdie naznačujú, že podporuje vznik oxidačného stresu a teda môže viesť k oxidačnému poškodeniu buniek a DNA. Cieľom tejto štúdie bolo pozorovanie závislosti medzi oxidačným poškodením DNA a kritickým stavom spôsobeným ochorením COVID-19 s použitím techniky kométovej analýzy. Základný princíp použitej metódy spočíva vo fixácii lymfocytov v agarózovom gély, odstránení membrány a cytoplazmy buniek, inkubácii so špecifickými enzýmami a elektroforéze. V procese elektroforézy dochádza k migrácii negatívne nabitých fragmentov DNA smerom k anóde a bunka tak nadobúda typický tvar kométy. Kométy vizualizujeme pomocou DNA interkalačného farbiva etídia bromidu. Kvantifikovali sme jednoreťazové zlomy a s použitím špecifických enzýmov (modifikácia metódy na detekciu špecifických lézií) aj oxidované pyrimidíny a puríny. Výsledky sú udávané ako % tail DNA, teda množstvo DNA vo chvoste kométy v percentách. Stanovenie DNA poškodenia...