Příprava rekombinantní cDNA některých lékových transportérů

Abstract

SOUHRN Amplifikovali jsme CDS pro transportér ABCC4, ABCC5. Pro amplifikaci ABCC5 jsme navrhli dva systémy, pouze první systém jsme zaklonovávali. Optimální teplota annealingu byla 64 řC a optimální koncentrace hořčíku byla 2mM. Jako klonovací kit se nám osvědčil až TOPO XL. Do vektoru jsme zaklonovali CDS pro ABCC4, ABCC5. Inzerty jsme štěpili pomocí restrikčních endonukleáz. ABCC4 jsme vyštěpili Spe I a Not I. ABCC5 jsme štěpili pomocí EcoR I a Hind III. Stejnými endonukleázami jsme štěpili i pZeoSV2(-). Poté jsme inzerty zaklonovali do pZeoSV2(-).

CDS for ABCC4 and ABCC5 transporters were amplified. For ABCC5 two systems were outlined, however the only first one was used. The optimal annealing temperature was 64 řC; optimal concentration of magnesium was 2mM. TOPO XL have proved best results in our research in between cloning kits we tried. The CDS for ABCC4 and ABCC5 were cloned into the vector. Inserts were rended with the use of restrictive endonucleasis. ABCC4 was gashed by Spe I and Not I and ABCC5 by EcoR I and Hind III. With the same endonucleasis, the process of rending was repeated for pZeoSV2(-). Afterwards, the inserts were cloned into pZeoSV2(-).