Analytické hodnocení nových potenciálních léčiv ze skupiny chelátorů železa s využitím HPLC I.

Abstract

Vysokoúcinná kapalinová chromatografie (HPLC) patrí v soucasnosti mezi nejmodernejší a nejpoužívanejší analytické separacní metody. Biokompatibilní chelátory železa jsou v terapii používány predevším pro lécbu pretížení organismu železem. Nicméne, ve svetle nových informací o fyziologické a patofyziologické roli železa v organismu došlo k výraznému rozšírení jejich potenciálu i do oblastí dalších chorob. Bylo prokázáno, že vykazují napr. antioxidacní, kardioprotektivní a cytostatické úcinky. Tyto úcinky prokazuje i biokompatibilní chelátor železa salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazon. Jeho využití však ztežuje krátký polocas rozkladu v plazme. V dnešní dobe se od jeho struktury odvozují deriváty, u kterých se predpokládá vetší stabilita. Jedním z nich je 2'-hydroxypropiofenon isonikotinoyl hydrazon (HPP-INH). Cílem této práce bylo vyvinutí optimálních chromatografických podmínek HPLC analýzy HPP-INH a metody úpravy vzorku precipitací pro stanovení analytu v plazme. Analýza byla provádena na kolone Merck 250x4 mm I. D. s náplní LiChrospher® 100, RP-18e (5 μm) s predkolonou Purospher® 100, RP-18e (5 μm). Pro hodnocení cistoty byla použita mobilní fáze: smes fosfátový pufr (0,01 mol/l vodný roztok NaH2PO4 · 2 H20) s 2 mmol/l EDTA, pH 6 bylo upraveno 0,1 mol/l roztokem NaOH : methanol (A:B), 0:00 - 10:00 min B...

Nowadays, high performance liquid chromatography (HPLC) belongs among the most modern and most frequently used analytical separation techniques. Biocompatible iron chelators are mainly used for the treatment of iron overload. Nevertheless, in the light of new information about physiological and patophysiological role of iron in organism, their potential use was widened into other diseases. Iron chelators were proved to have antioxidative, cardioprotective and cytostatic effects. Salicylaldehyde isonicotinoyl hydrazone is a biocompatible iron chelator, which also shows these activities. However, its short half life in plasma makes its use difficult. Nowadays, novel derivates of SIH were prepared to improve its stability in plasma. 2'-hydroxypropiophenone isonicotinoyl hydrazone (HPP-INH) is one of newly prepared SIH derivates. The aim of this study was to develop optimal chromatographic conditions for HPLC analysis of HPP-INH and to develop sample pretreatment method using precipitation for its analysis in plasma. The analysis was carried out on a Merck 250x4 mm column I.D. LiChrospher® 100, RP-18e (5 μm) protected with Purospher® 100, RP-18e (5 μm) guard column. The following mobile phase gradient condition was developed for HPP-INH purity evaluation: phosphate buffer (0,01 mol/l NaH2PO4 · 2 H20 water...