Elicitace suspenzní kultury Trifolium pratense L.

Abstract

SOUHRN Explantátová kultura Trifolium pratense L. Souhrn Cílem práce bylo sledovat vliv elicitorů kyseliny jasmínové a chloridu rtuťnatého na produkci flavonoidů u suspenzní kultury Trifolium pratense L. (varieta Tempus). U elicitoru chloridu rtuťnatého byl sledován jeho vliv také na produkci isoflavonoidů výše zmíněnou suspenzní kulturou. Kultury byly kultivovány na živném mediu podle Gamborga s přídavkem 2 mg.l-1 2,4-dichlorfenoxyoctové kyseliny a 2 mg.l-1 6-benzylaminopurinu při teplotě 25řC a světelné periodě 16 hodin světlo/8 hodin tma. U elicitovaných a kontrolních vzorků bylo provedeno fotometrické stanovení flavonoidů dle Českého lékopisu 2005 a stanovení isoflavonoidů metodou HPLC. Z výsledků elicitace suspenzní kultury Trifolium pratense L. oběma elicitory je patrné, že jako výhodnější z obou elicitorů se jeví kyselina jasmínová. Oproti chloridu rtuťnatému zde došlo k statisticky významnému zvýšení produkce flavonoidů při použití koncentrace elicitoru 5 μmol a době působení 24 hodin. Metodou HPLC byly zjištěny isoflavonoidy genistin, genistein a daidzein. Pozitivně lze hodnotit zvláště 168 hodinovou aplikaci 10 μmol chloridu rtuťnatého, která stimulovala produkci všech těchto flavonoidů.

Explant culture of Trifolium pratense L. Summary The objektive of this work was to observe the effect of the elicitors of jasmonic acid and mercuric chloride on the production of flavonoids by the Trifolium pratense L. suspension culture (variety Tempus). By the elicitor of mercuric chloride was observed also its effect to the production of isoflavonoids in the same culture. The cultures were cultivated in Gamborg nutriet media with the addition of 2 mg.l-1 2,4-dichlorphenoxyacetic acid and 2 mg.l-1 6-benzylaminopurine, at the temperature of 25řC and 16-hours light/8-hours dark period. The elicited and control samples underwent the photometric determination of flavonoids in accordance with the Czech Pharmacopoeia 2005 and the determination of isofavonoids via the HPLC method. From the results of the elicitation of Trifolium pratense L. by both elicitors we can see, that more profitable of these is jasmonic acid. Compared to the mercuric chloride there was found a significant incerase of flavonoid production while using a concentration of 5 μmol and operating time 24 hours. Via the HPLC metod were found out the isoflavonoids genistin, genistein and daidzein. We can positively evaluate mainly 168-hours aplication of 10 μmol mercuric chloride, which stimulated the production of all these flavonoids.