Explantátová kultura Trifolium pratense L.

Abstract

8. SOUHRN Explantátová kultura Trifolium pratense L. Základním předpokladem úspěšné elicitace, která se využívá ke zvýšení produkce sekundárních metabolitů, je mimo jiné nalezení vhodného elicitoru, jeho koncentrace a optimální doby působení elicitoru na rostlinnou kulturu in vitro, což bylo předmětem této diplomové práce. Byl sledován vliv 6, 24, 48 a 168hodinového působení roztoku chloridu rtuťnatého (ve čtyřech koncentracích) na produkci flavonoidů a isoflavonoidů v kalusové a suspenzní kultuře Trifolium pratense L., která byla kultivována na médiu podle Gamborga s přídavkem 2 mg.l-1 2,4-dichlorfenoxyoctové kyseliny a 2 mg.l-1 6-benzylaminopurinu, při teplotě 25řC a světelné periodě 16 hodin světlo/8 hodin tma. Maximální obsah flavonoidů, zjištěný fotometrickým stanovením podle Českého lékopisu 2005, byl prokázán u kalusové kultury (0,636 %) po 6hodinovém působení elicitoru o koncentraci 100 µmol a u suspenzní kultury (0,492 %) po 168hodinovém působení elicitoru o koncentraci 10 µmol. Maximální obsah isoflavonoidů, zjištěný metodou HPLC, byl prokázán u suspenzní kultury po 168hodinovém působení elicitoru o koncentraci 100 µmol (0,03 % daidzeinu) a po 168hodinovém působení elicitoru o koncentraci 10 µmol (0,59 % genistinu).

Explant Culture of Trifolium pratense L. A principial precondition for successful elicitation used to increase the production of secondary metabolities is, among other, finding a suitable elicitor, its concentration and the optimal period of time of the action of the elicitor on the plant culture in vitro, which was the aim of the present thesis. The effect was examined of a 6, 24, 48 and 168 hour action of the solution of mercury dichloride (in four concentrations) on the production of flavonoids and isoflavonoids in the callus and suspension culture of Trifolium pratense L. cultivated on a Gamborg medium with an addition of 2 mg.l-1 of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 2 mg.l-1 of 6-benzylaminopurine, at the temperature of 25řC and 16 hour light/8 hour dark period. The maximal content of flavonoids found by a photometric determination according to Pharmacopoeia Bohemica 2005 was demonstrated in the callus culture (0,636 %) after 6 hour action of the elicitor of the 100 µmol concentration and in the suspension culture (0,492 %) after 168 hour action of the elicitor of the 10 µmol concentration. The maximal content of isoflavonoids found by a HPLC method was demonstrated in the suspension culture after 168 hour action of the elicitor of the 100 µmol concentration (0,03 % of daidzein) and after 168...