Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu a její aplikace v klinickém výzkumu

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Lenka Vrbová Supervisor: assoc. prof. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Consultant: PharmDr. Kateřina Matoušová, Ph.D. Title of the diploma thesis: Development and validation of UHPLC-MS/MS method for determination of urea in exhaled breath condensate and its application in clinical research Key words: urea, exhaled breath condensate, UHPLC-MS/MS Exhaled breath condensate analysis is a simple non-invasive method of measuring biomarkers not only from the respiratory tract. For the proper clinical interpretation of the measured data it is necessary to find the dilution biomarker due to dilution of target analytes with condensed water vapour. Urea seems to be the molecule of choice. The aim of this diploma thesis was to develop a fast, simple and sensitive analytical method for determining urea concentration levels in exhaled breath condensate for clinical research. Ultra-high performance liquid chromatography with mass spectrometry detection was chosen for urea analysis. Kinetex HILIC 100 A column, 1.7 µm particle size, 100 × 2.10 mm (Phenomenex, USA) was used for the separation. The mobile phase was composed of acetonitrile, methanol and water in a ratio of 81 : 9 : 10, the organic part was...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Lenka Vrbová Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Kateřina Matoušová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu a její aplikace v klinickém výzkumu Klíčová slova: močovina, kondenzát vydechovaného vzduchu, UHPLC-MS/MS Analýza kondenzátu vydechovaného vzduchu představuje jednoduchou a neinvazivní metodu měření biomarkerů nejen dýchacích cest. Protože jsou naměřené hladiny těchto mediátorů ovlivněny ředěním zkondenzovanou vodní párou, je pro správnou klinickou interpretaci naměřených dat nezbytné stanovit biomarker ředění. Močovina se zdá být vhodnou molekulou. Cílem této diplomové práce bylo vytvořit rychlou, jednoduchou a citlivou analytickou metodu pro stanovení koncentrace močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu pro klinický výzkum a praxi. Pro analýzu močoviny byla zvolena ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v tandemovém uspořádání s hmotnostní spektrometrií. K separaci byla využita kolona Kinetex HILIC 100 A o rozměrech 100 × 2,10 mm (Phenomenex, USA) s povrchově porézními částicemi o velikosti 1,7 µm. Mobilní fázi tvořily acetonitril, methanol a voda v poměru 81 : 9 :...