Optimalizace přípravy jaterních sferoidů

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Tereza Vojtěchová Supervisor: assoc. prof. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Advisor: PharmDr. Martin Ambrož, Ph.D. Title of diploma thesis: Optimization of liver spheroids preparation Various in vitro liver models play an irreplaceable role in preclinical drug evaluation. One of them is multicellular hepatic spheroids. These are 3D cell aggregates that are formed by the process of cellular aggregation. They are used in drug development and represent a promising tool for identifying new targets and drug screening for various liver diseases. The aim of this thesis was to introduce and optimize the preparation of liver spheroids by the "forced-floating" method. The liver of male and female Wistar rats was used for hepatocyte isolation and spheroid preparation. Due to the low viability of isolated hepatocytes, we tried to optimize the isolation procedure. Nevertheless, we managed to obtain only a small number of hepatocytes with sufficient viability for subsequent formation of spheroids. The spheroids were incubated with various lipogenic reagents for 7 and 14 days and their viability was monitored by measuring adenosine triphosphate (ATP) production. Incubation of spheroids with lipogenic substrates...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Tereza Vojtěchová Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Martin Ambrož, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace přípravy jaterních sféroidů V preklinickém hodnocení léčiv hrají nezastupitelnou roli různé jaterní in vitro modely. Jedním z nich jsou multicelulární jaterní sféroidy. Jedná se o 3D buněčné agregáty, které vznikají procesem buněčné agregace. Jsou využívány ve vývoji léčiv a představují slibný nástroj pro identifikaci nových cílů a screening léčiv na různá jaterní onemocnění. Cílem této diplomové práce bylo zavést a optimalizovat přípravu jaterních sféroidů metodou "forced- floating". Pro izolaci hepatocytů a přípravu sféroidů byly použity játra samců a samic potkana kmene Wistar. Při izolaci hepatocytů jsme čelili problémům s jejich nízkou viabilitou, proto jsme se postup izolace snažili optimalizovat. Přesto se nám podařilo získat pouze malé množství hepatocytů s dostatečnou viabilitou k následnému vytvoření sféroidů. Vytvořené sféroidy jsme inkubovali po dobu 7 a 14 dnů s různými lipogenními činidly a sledovali jsme jejich viabilitu pomocí měření produkce adenosintrifosfátu (ATP). Při inkubaci sféroidů s lipogenními substráty po dobu 7 dnů nedošlo k zásadním...