Hodnocení efektivity vybraných metodických přístupů za účelem disagregace stafylokokové biofilmové biomasy

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biological and Medical Sciences Subject of study: Bioanalytical laboratory diagnostics in healtcare Student: Bc. Martina Nosková Supervisor: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Title: Evalution of the effectiveness of selected methodical approaches for disagregation of staphylococcal biofilm biomass Background: Evaluation of the impact of selected biochemical and physical approaches on the disaggregation of the biofilm community formed by the bacterium Staphylococcus aureus. For the biochemical approach was chosen enzyme proteinase K, the impact of sonication, shaking with/without glass beads was studied within the physical approaches. Methods: Staphylococcal biofilm was formed in vitro in two methodical configurations - in the wells of a microtiter plate and on pegs (analogy to the Calgary Biofilm Device). To evaluate the degree of consistency of the obtained data, which reflects the homogenity of the biofilm biomass disaggeragation, the "recovery" method, and the method of metabolic activity evaluation, using the Alamar Blue indicator. To express the degree of effectiveness of the chosen approaches on the overall disaggregation of the biofilm community, the method of quantification of biofilm biomass by crystal violet staining was...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví Autor: Bc. Martina Nosková Školitel: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Hodnocení efektivity vybraných metodických přístupů za účelem disagregace stafylokokové biofilmové biomasy Cíl práce: Odhalit vliv vybraných biochemických a fyzikálních vlivů na disagregaci biofilmového společenství tvořeného bakterií Staphylococcus aureus. Pro biochemický přístup byl zvolen enzym proteinasa K, v rámci fyzikálních vlivů byl studován dopad sonikace, třepání s/bez skleněných kuliček. Metody: Stafylokokový biofilm byl formován in vitro, ve dvou metodických uspořádáních - v rámci jamek mikrotitrační destičky a na kolíčcích (analogie Calgary Biofilm Device). Pro hodnocení míry konzistence získaných dat, odrážejících homogenitu odloučených biofilmových biomas byla volena "recovery" metoda a metoda detekce metabolické aktivity pomocí indikátoru Alamar Blue. Pro vyjádření míry účinnosti volených přístupů na celkovou disagregaci biofilmového společenství byla volena metoda kvantifikace biofilmové biomasy barvením krystalovou violetí. Výsledky: V případě biochemického přístupu (enzym proteinasa K) byl prokázán statisticky významný vliv na...