Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability

Abstract

V ANGLICKÉM JAZYCE Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Kateřina Kaňková Supervisor: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Supervisor-consultant: doc. PharmDr. Ondřej Soukup, Ph.D. Title of diploma thesis: Assessment of drug cytotoxicity using various cell viability tests Nowadays, cell viability assays are an important part of preclinical studies. There is a wide spectrum of different methods that can be used for such purposes. This thesis aims to compare some of the fundamental methods, their accuracy and selectivity, as well as the advantages and drawbacks of their application. Six different drugs were measured using five different cell viability assays - colorimetric (MTT, crystal violet), fluorimetric (propidium iodide, calcein-AM) and luminometric (ATP) on the CHO-K1 cell line. The outcomes of all methods are IC50 values of used drugs assessing their cytotoxicity, including graphic representations of the measurements and standard deviations. Finally, all the methods are compared based on experience gained during the experiment as well as information gained during the theoretical research. Among the most suitable methods belong the MTT and ATP assay. Due to some difficulties during the measurement (e.g. unsuitable for use in...

V ČESKÉM JAZYCE Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Kateřina Kaňková Školitel: doc. RNDr. Jakub Hofman, Ph.D. Školitel-konzultant: doc. PharmDr. Ondřej Soukup, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení cytotoxicity léčiv s využitím různých testů buněčné viability V současné době metody buněčné viability jsou důležitou součástí preklinických studií. Existuje široké spektrum metod na různé bázi, které lze pro tyto účely použít. Cílem této práce je porovnání některých základních metod, jejich přesnost a selektivitu, výhody a nevýhody aplikace. Šest různých léčiv bylo proměřováno pěti metodami buněčné viability - kolorimetrické metody (MTT, krystalová violeť), fluorimetrické (propidium jodid, calcein-AM) a luminometrické (ATP) na CHO-K1 buněčné linii. Výstupem všech metod jsou hodnoty IC50 pro daná léčiva kvantifikující jejich cytotoxicitu vč. grafického znázornění měření a směrodatné odchylky. Na závěr jsou jednotlivé metody porovnány na základě získané zkušenosti při práci a informací získaných při teoretickém průzkumu literatury. Mezi nejvhodnější metody lze zařadit MTT a ATP esej. Kvůli problémům při měření (např. nevhodnost použití u adherentních linií) se jako méně vhodná metoda jeví calcein- AM. Jako nejméně vhodné metody se potom...