Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Dominika Knoblochová Supervisor: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Title of thesis: Development and Validation of HPLC Method for Determination of 3-Hydroxykynurenine in Biological Material 3-Hydroxykynurenine is one of the metabolites of tryptophan and is studied especially for its oxidative modulatory activity, which provides the ability to protect cells from oxidative stress. It is formed from kynurenine by catalysis of the enzyme kynurenine monooxygenase, whose activity is monitored at the Department of Pharmacology and Toxicology. It is necessary to quantify 3-hydroxykynurenine in a biological matrix for its study. The aim of this diploma thesis was to develop an HPLC method for the determination of 3-hydroxykynurenine in biological material using high performance liquid chromatography and subsequent method validation. During development, several mobile phases with different pH values were tested. The resulting mobile phase consisted of 100 mM formic acid (pH = 2.25) and methanol (95:5). Different types of stationary phases were also tested, from which a YMC TRIART PFP column with dimensions of 15 × 3 mm and a particle size of 5 µm was finally chosen. A UV-VIS...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Dominika Knoblochová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu 3-hydroxykynurenin je jedním z metabolitů tryptofanu a je studován zvláště pro svoji oxidačně modulační aktivitu, díky které má schopnost chránit buňky před oxidačním stresem. Je tvořen z kynureninu katalýzou enzymu kynurenin 3-monooxygenasa, jehož aktivita je sledována na Katedře farmakologie a toxikologie. Pro její studování je třeba kvantitativně stanovit 3-hydroxykynurenin v biologické matrici. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout HPLC metodu pro stanovení 3-hydroxykynureninu v biologickém materiálu s použitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a následně metodu validovat. Během vývoje bylo testováno několik mobilních fází s různými hodnotami pH. Výsledná mobilní fáze byla tvořena 100mM kyselinou mravenčí (pH = 2,25) a methanolem (95:5). Byly také zkoušeny různé typy stacionárních fází, z nichž byla nakonec zvolena kolona YMC TRIART PFP s rozměry 15 × 3 mm a rozměrem částic 5 µm. K detekci 3-hydroxykynureninu byl zvolen UV-VIS detektor, na němž byla nastavena vlnová délka 370 nm. Byla...