Stanovení metabolitů tyrosinu III

Abstract

CHARLES UNIVERSITY FACULTY OF PHARMACY IN HRADEC KRÁLOVÉ DEPARTMENT OF PHARMACEUTICAL CHEMISTRY AND PHARMACEUTICAL ANALYSIS Candidate: Gabriela Licková Supervisor: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Consultant: Ing. Daniel Heblík Titile of thesis: Determination of tyrosine metabolites The topic of thesis was determination of tyrosine metabolites (epinephrine, norepinephrine, dopamine, L-DOPA) using derivatization reaction and later analysis using High-performance liguid chromarography with fluorescence detector. The important step of all work was optimalization of conditions of derivatization reaction. As derivatization agent it was used FMOC-Cl (fluorenylmethyloxycarbonyl chloride), which reacted with catecholamines together with borate buffer. Firstly, it was set the ideal concentration of agent (2,7 mM), also the time (15 min) and the temperature (40 řC) of reaction. The concetration (100 mM) and pH (8,0) of borate buffer was optimalized in the end. For effective separation it was necessary to set ideal conditions. As silica gel column was used Kinetex EVO C18 with core-shell particles. The compositions of mobile phase was necessary to optimalize and resulting mobile phase was composed from formic acid (20 mM) and acetonitrile in proportion 32:68. Used flow rate was 0,6 ml/min. The column was tempered...

UNIVERZITA KARLOVA FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A FARMACEUTICKÉ ANALÝZY Kandidát: Gabriela Licková Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Petr Kastner, Ph.D. Konzultant: Ing. Daniel Heblík Název diplomové práce: Stanovení metabolitů tyrosinu Tématem diplomové práce bylo stanovení metabolitů tyrosinu (adrenalin, noradrenalin, dopamin, L-DOPA) s využitím derivatizační reakce a následnou analýzou za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenčním detektorem. Stěžejním krokem celé práce byla optimalizace podmínek derivatizační reakce. Jako derivatizační činidlo byl použit FMOC-Cl (fluorenylmethyloxykarbonyl chlorid), který reagoval s katecholaminy v přítomnosti borátového pufru. Nejprve byla stanovena vhodná koncentrace činidla (2,7 mM), čas (15 min) a teplota (40 řC) reakce. Dále byla optimalizována koncentrace (100 mM) a pH (8,0) borátového pufru. Pro účinnou separaci bylo nutné nastavit vhodné podmínky. Kolona byla použita silikagelová Kinetex EVO C18 s částicemi s pevným jádrem. Složení mobilní fáze bylo nutné optimalizovat a výsledná mobilní fáze se skládala z kyseliny mravenčí (20 mM) a acetonitrilu v poměru 32:68. Výsledná použitá průtoková rychlost činila 0,6 ml/min. Kolona byla temperována na 40 řC. Nástřikový objem byl 5 μl a doba celé analýzy...