Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradci Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Lucie Kunzová Supervisor: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Consultant: Mgr. Nikola Rychlá Title of Thesis: Characterization of carbonyl-reducing enzymes in barber's pole worm Barber's pole worm (Haemonchus contortus), one of the most pathogenic parasites of small ruminants as sheep and goats, has developed resistance against all used anthelmintic drugs. Detoxifying enzymes, which represent the main defense system against harmful xenobiotics, can also contribute to the development of drug resistance, and they are not fully explored in this organism. This research is focused on the study of carbonyl-reducing enzymes in barber's pole worm using specific substrates and inhibitors. Subcellular fractions (cytosol and microsomes) were prepared from adult worms for following in vitro experiments. Protein concentration and reductase activity towards different substrates were determined in each fraction. Substrates were chosen based on knowledge of human biotransformation enzymes. The highest activity in cytosol has been detected for glyceraldehyde (8,22 ± 0,82 [nmol/min/mg]) and menadione (4,63 ± 0,46 [nmol/min/mg]), in microsomal fraction for menadione (4,38 ± 0,36 [nmol/min/mg]) and metyrapone (1,92...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Kunzová Školitel: prof. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Konzultant: Mgr. Nikola Rychlá Název diplomové práce: Charakterizace enzymů redukujících karbonylové sloučeniny u vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus), jeden z nejpatogennějších parazitů malých přežvýkavců jako jsou kozy a ovce, si vyvinul rezistenci vůči všem používaným anthelmintikům. Předpokládá se, že k rozvoji lékové rezistence přispívají i detoxikační enzymy, které představují hlavní obranný systém proti škodlivým xenobiotikům a u tohoto druhu nejsou plně prozkoumány. Tato práce je proto zaměřená na studium enzymů vlasovky slezové, konkrétně na reduktasy karbonylových sloučenin pomocí specifických substrátů a inhibitorů. Byly připraveny subcelulární frakce (cytosol a mikrosomy) z dospělců vlasovky slezové pro následné in vitro experimenty. V jednotlivých frakcích byla stanovena koncentrace proteinů a aktivita reduktas vůči různým substrátům. Substráty byly zvoleny na základě znalosti o lidských biotransformačních enzymech. Nejvyšší aktivita v cytosolu byla zjištěna pro substráty glyceraldehyd (8,22 ± 0,82 [nmol/min/mg]) a menadion (4,63 ± 0,46 [nmol/min/mg]), v mikrosomální frakci pro menadion (4,38 ± 0,36 [nmol/min/mg])...