Detekce solubilního endoglinu v Lab-in-Syrige
Detection of soluble endogline in Lab-in-Syringe
diploma thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/186995Identifiers
Study Information System: 239719
Collections
- Kvalifikační práce [6623]
Author
Advisor
Consultant
Tripská, Katarína
Horstkotte, Burkhard
Referee
Chocholouš, Petr
Faculty / Institute
Faculty of Pharmacy in Hradec Králové
Discipline
Bioanalyticla laboratory diagnostics in health care
Department
Department of Biological and Medical Sciences
Date of defense
12. 9. 2023
Publisher
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci KrálovéLanguage
Czech
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
Protilátky, magnetické částice, Lab-in-SyrigeKeywords (English)
Antibodies, magnetic particles, Lab-in-SyrigeHlavním úkolem diplomové práce bylo vyvinout automatizované metody pro izolaci endoglinu ze vzorku pomocí magnetického imunosorbentu v Lab-In-Syringe s následnou imunodetekcí na affiblotu. Teoretická část se věnuje endoglinu v jeho membránové i solubilní formě, zejména jejich souvislostem s endotelovou dysfunkcí. Je zde také stručně popsán princip anti-endoglinové terapie pomocí monoklonální protilátky carotuximab neboli TRC105. Dále jsou v teoretické části shrnuty informace o technikách Lab-In-Syringe a affiblot. Poslední kapitola pojednává o biofunkcionalizaci magnetických částic pomocí protilátek za účelem přípravy magnetického imunosorbentu a jeho využití pro izolaci proteinu ze vzorku. V experimentální části jsou nejprve popsány postupy pro otestování prototypů affiblotu. Hlavním cílem bylo vyvinout metodu pro přípravu anti-endoglinového magnetického imunosorbentu a zvýšit kapacitu metody jejím převedením z 1ml do 5ml stříkačky (upscaling). Dále byly vyvinuty metody pro izolaci solubilní formy lidského endoglinu z kultivačního média s obsahem léčiva TRC105, které interferuje s jeho imunodetekcí, opět pro 1ml a 5ml stříkačku. Byla provedena řada experimentů za účelem optimalizace metod v Lab-In-Syringe a na závěr byly metody vyzkoušeny se vzorky a výsledky se hodnotily na affiblotu. Klíčová...
The main target of the thesis was to develop an automated method for the isolation of endoglin from a sample using a magnetic immunosorbent in Lab-In-Syringe with subsequent immunodetection by affiblot. The theoretical part deals with endoglin, in its membrane and soluble form, especially with their connection to endothelial dysfunction. The principles of anti-endoglin therapy using the monoclonal antibody carotuximab or TRC105 are also briefly described here. Furthermore, the theoretical part summarizes the basics of the automation in Lab-In-Syringe and of the affiblot technique, their principles, and their applications. The last chapter deals with the biofunctionalization of magnetic particles by antibodies in order to prepare a magnetic immunosorbent which is used for the isolation of proteins from a complex sample. The experimental part describes methods for testing the affiblot prototypes. The main goal was to develop a method for the preparation of anti-endoglin magnetic immunosorbent and to increase the capacity of the method by upscaling it from a 1 ml to a 5 ml syringe. Furthermore, methods for the isolation of the soluble form of human endoglin from the culture medium containing the drug TRC105 were developed for 1 ml and 5 ml syringes. Various experiments were carried out to optimize the...