Klonování a příprava plasmidu pro expresi reduktasy sdr12 z vlasovky slezové

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Štěpánka Jakubcová Supervisor: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Title of diploma thesis: Plasmid construction for expression of sdr12 reductase from Haemonchus contortus The barber's pole worm (Haemonchus contortus) is a parasitic nematode causing a severe disease known as haemonchosis, affecting livestock, especially sheep and goats. Anthelmintic resistance represents a significant problem in the agricultural sector, with notable economic impacts associated with decreased animal productivity. Short-chain dehydrogenases/reductases (SDRs) are essential enzymes involved in the biotransformation of xenobiotics and may relate to anthelmintic resistance. The theoretical section describes the barber's pole worm, haemonchosis, treatment resistance, and the biotransformation of xenobiotics focusing on SDR enzymes. The experimental section involves the preparation of a vector (plasmid) carrying the protein-coding region of the sdr12 gene to express and isolate the recombinant protein. The results were achieved by using molecular biology methods such as PCR, ligation of the insert to vector, transformation of competent cells, restriction enzyme digestion, DNA sequencing, agarose gel electrophoresis,...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Štěpánka Jakubcová Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování a příprava plasmidu pro expresi reduktasy sdr12 z vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus) je parazitická hlístice způsobující závažné onemocnění nazývané hemonchóza, které postihuje hospodářská zvířata, zejména ovce a kozy. Problematika rezistence hlístic na léčbu anthelmintiky představuje významný problém v zemědělském sektoru s výraznými ekonomickými dopady spojenými s nižší produktivitou zvířat. Dehydrogenasy/reduktasy s krátkým řetězcem (SDR) jsou významné enzymy podílející se na metabolické přeměně xenobiotik v organismu, které by mohly souviset s anthelmintickou rezistencí. V teoretické části diplomové práce je popsána vlasovka slezová, hemonchóza, rezistence hlístic na léčbu a biotransformace xenobiotik s důrazem na enzymy SDR. Experimentální část práce zahrnuje přípravu vektoru (plasmidu) nesoucího kódující oblast genu sdr12, expresi a izolaci příslušného proteinu. Výsledků bylo dosaženo využitím molekulárně biologických metod, jakými jsou: PCR, ligace insertu do vektoru, transformace kompetentních buněk, restrikční štěpení, sekvenování, agarosová elektroforéza a western blot....