Příprava protinádorové vakcíny pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek správné výrobní praxe

Abstract

Příprava protinádorové vakcíny pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek správné výrobní praxe Úvod: Dendritické buňky (DC) jsou jediné antigen prezentující buňky schopné aktivovat naivní T-lymfocyty. Aby byly schopné aktivovat imunitní odpověď musí DC projít procesem maturace. Nové techniky umožňují přípravu DC z monocytů, a je tedy možné připravovat protokoly protinádorové imunoterapie založené na DC. Principem je podání velkého množství DC, které prezentují nádorové antigeny a následná aktivace specifické imunitní reakce proti nádorové tkáni. Pro zahájení klinických studiích je nezbytný vývoj protokolů, které zaručují přípravu vakcíny za podmínek Správné výrobní praxe podle požadavků Státního ústavu pro kontrolu léčiv. Cíl: Vývoj protokolu pro přípravu DC pro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek Správné výrobní praxe. Definice optimálního maturačního stimulu, který zaručí nejlepší aktivaci antigen specifických T lymfocytů. Materiál a metody: Z monocytů periferní krve zdravých dárců byly připraveny nezralé DC. Testovali jsme tři různá média, připadající v úvahu pro klinické použití, Cell Gro, RPMI s 10% fetálního jehněčího séra a RPMI s 5% lidského AB séra. V dalším kroku byly DC aktivovány třemi různými maturačními stimuly (směsí cytokinů, Poly I:C a lipopolysacharidem (LPS)). Po 24h byl...

Generation of clinical-grade dendritic cell-based vaccine for immunotherapy of ovarian cancer Introduction: Dendritic cells (DCs) the most potent antigen presenting cells. Recent technological advances allow for generation of large numbers of DCs from peripheral blood monocytes. Administration of activated DCs loaded with tumor antigens is thus an attractive approach for immunotherapy of cancer. Prerequisite for the initiation of clinical trials in cancer immunotherapy is the development of protocols for DC-based vaccine generation according to Good Manufacturing Practice (GMP) conditions. Aim of the study: Development of protocol for the generation of clinical grade vaccine based on activated DCs loaded with killed tumor cells for use in the immunotherapy of ovarian cancer. Materials and methods: Immature DCs were generated from peripheral blood monocytes of healthy donors. We tested Cell Gro and RPMI+5% pooled human serum (5% PHS) as clinical grade culture media. Immature DCs were then activated by three distinct stimuli (Poly I:C, LPS and cocktail of proinflammatory cytokines (TNF, IL-1 and IL-6)). Activated DCs were evaluated for their phenotypic and functional characteristics and for their capacity to activate antigen specific and/or regulatory T cells. Results: Culture of monocytes in Cell Gro yielded...