Development of dual-(+1)-Fluorescence Correlation Spectroscopy for MonitoringProtein Oligomerization Leading to Membrane Pore Formation

Abstract

Title: Vývoj duální-(+1)-fluorescenční korelační spektroskopie pro sledování oligomerizace proteinů vedoucí k tvorbě membránových pórů Author: Vandana Department: Biofyzika, chemická a makromolekulární fyzika Supervisor: doc. RNDr. Radek Šachl, Ph.D., Tato disertační práce představuje na příkladu fibroblastového růstového faktoru 2 (FGF2) nový statistický přístup, který dokáže odlišit "funkční" oligomery vložené do membrán od "nefunkčních" proteinových agregátů spojených s membránami. Jeho použití se rozšiřuje nejen na FGF2, ale i na mnoho dalších proteinů asociovaných s membránami, které vyvolávají tvorbu membránových pórů. Princip tohoto přístupu je založen na dvoubarevné fluorescenční korelační spektroskopii (FCS) aplikované na jednotlivé obří unilamelární vezikuly (GUV). Analýzou jasu a difúzních vlastností fluorescenčně značených proteinů poskytuje zásadní poznatky o velikosti oligomerů proteinů, difúzních koeficientech, povrchových koncentracích a propustnosti membrán na volně stojících částech membrán GUVs. Pracuje v širokém rozsahu povrchových koncentrací proteinů, což umožňuje hlubší zkoumání oligomerizace proteinů. Metoda dual-(+1)-FCS, speciálně přizpůsobená pro studium membránových proteinů, vyniká schopností komplexně analyzovat více parametrů v jediném experimentu. Celkově naše...