Využití HPLC pro separaci biokonjugátů azaftalocyaninů

Abstract

Diplomová práce Využití HPLC pro separaci biokonjugátů azaftalocyanínů Marta Kaminská Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Táto diplomová práca sa zaoberá hľadaním vhodných chromatografických podmienok pre separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov. Tieto látky sú predmetom skúmania ako potencionálne zhášače fluorescencie, použiteľné pri konštruovaní molekulárnych sond. Boli uskutočnené merania v analytickom i semipreparatívnom merítku. Celkom sme testovali 9 chromatografických kolόn, všetky typu C18. Pracovali sme v izokratickom i gradientovom mόde a zmenou zloženia mobilnej fázy sme optimalizovali podmienky separácie analyzovanej zmesi. Pre separáciu biokonjugátov azaftalocyanínov boli zistené tieto optimálne podmienky : Pre analytické účely :  stacionárna fáza : Hypersil BDS, 100 × 4,6 mm, veľkosť častíc 3 μm  mobilná fáza : zložka A - 50 mM roztok TEAA a 12 % ACN vo vode zložka B - 100 % acetonitril gradientová eluce  detekcia prebiehala pri vlnových dĺžkach 254 nm, 374 nm, 552 nm, 673 nm, teplota na kolóne 40 ˚C a rýchlosti prietoku mobilnej fázy 1ml/min. Pre semipreparatívne účely :  stacionárna fáza : Hypersil BDS, 250 × 4,6 mm, veľkosť častíc 5 μm  mobilná fáza : zložka A - 50 mM roztok TEAA a 12 % ACN vo vode...

Diploma thesis The employment of HPLC for separation of bioconjugates of azaphtalocyanines Marta Kaminská Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control This diploma thesis deals with development of suitable chromatographic conditions for separation of bio-conjugates of azaphthalocyanines. These compounds are of great interest today, they might be useful as potential quenchers of fluorescence in molecular probes. The experiments were carried out in analytical and semi-preparative scale. Nine C18 chromatographic columns were tested. The conditions for analytical and semi-preparative chromatography were optimized. The following chromatographic conditions for separation of bio-conjugates of azaphtalocyanines were found (analytical method):  Stationary phase : Hypersil BDS, 100 × 4,6 mm, 3 μm particle size  Mobile phase A : 50 mM water solution TEAA in 12 % acetonitrile;  Mobile phase B : acetonitrile;  Gradient elution.  Other conditions : column temperature 40 řC, flow rate 1 ml per minute  Detection 254 nm, 374 nm, 552 nm, 673 nm The following chromatographic conditions for separation of bio-conjugates of azaphtalocyanines were found (semi-preparative method) :  Stationary phase : Hypersil BDS 250 × 4,6 mm, 5 μm...