Analytické hodnocení nových potenciálních léčiv ze skupiny chelátorů železa s využitím HPLC II.

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) zaujímá dominantní postavení mezi moderními technikami užívanými pro kvalitativní i kvantitativní analýzu léčiv. Po adekvátní úpravě vzorků je HPLC také běžně používána pro stanovení léčiv a metabolitů v biologickém materiálu. Tato práce popisuje vývoj a validaci chromatografické metody pro analýzu 2',4'- dihydroxyacetofenon isonikotinoyl hydrazonu (DHAP-INH) - nového biokompatibilního chelátoru železa, a její použití pro hodnocení stability tohoto potenciálního léčiva v králičí plasmě in vitro. DHAP-INH patří do série nově nasyntetizovaných analogů salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazonu (SIH), která byla připravena s cílem zlepšit stabilitu látky v plasmě a přispět tak ke zlepšení farmakokinetických vlastností chelátorů odvozených od aromatických hydrazonů. Dostatečné separace DHAP-INH, jeho syntetických prekurzorů/rozkladných produktů (2,4-dihydroxyacetofenonu a isoniazidu) a vnitřního standardu (SIH) bylo dosaženo na koloně s náplní LiChrospher 100, RP-18 (250 mm × 4,6 mm I.D., 5 µm) s použitím mobilní fáze složené ze směsi fosfátového pufru (0,01 M NaH2PO4.2H2O; 2 mM EDTA; pH 6,0) a methanolu v poměru 54:46 (v/v). UV detekce byla prováděna při vlnových délkách 254 a 326 nm. Z testovaných rozpouštědel pro precipitační deproteinaci plasmy byl vybrán...

High performance liquid chromatography (HPLC) has a dominant position among the modern techniques in both the qualitative and quantitative drugs analysis. After adequate sample preparation it is also commonly used for the determination of drugs and metabolites in biological material. This study is focused on the development and validation of a chromatographic method suitable for the analysis of 2',4'-dihydroxyacetophenon isonicotinoyl hydrazone (DHAP-INH) - a novel biocompatible iron chelator, and its application for stability evaluation of this drug candidate in rabbit plasma in vitro. DHAP-INH is among newly synthesized salicylaldehyde isonicotinoyl hydrazone (SIH) analogues, which were prepared to improve compound stability in plasma and thus make pharmacokinetic profile of aroylhydrazones more favorable. Sufficient separation of DHAP-INH, its synthetic precursors/degradation products (2,4-dihydroxyacetophenon and isoniazide) and internal standard (SIH) was achieved on LiChrospher 100, RP-18 column (250 mm × 4,6 mm ID, 5 mm) employing a mobile phase composed of a mixture of phosphate buffer (0.01 M NaH2PO4.2H2O; 2 mM EDTA; pH 6,0) and methanol in a ratio of 54:46 (v/v). UV detection was performed at 254 and 326 nm. Different organic solvents were tested as precipitation agents, however...