Ovlivnění buněčné direrenciace u nádorových buněk analýzou exprese proteinu Serca3 jako markeru diferenciace

Abstract

V předložené práci jsme studovali proces buněčné diferenciace navozený inhibitory histon deacetyláz v buněčných liniích získaných z různých typů nemalobuněčného karcinomu plic. Cílem práce bylo studovat vzájemné spoluovlivnění procesu buněčné diferenciace a exprese proteinu SERCA (ATPázy Sarko/Endoplazmatického retikula), který zajišťuje transport vápníku z cytozolu do endoplazmatického retikula. Buněčné linie různých plicních nádorů byly kultivovány in vitro za přidání různých inhibitorů histon deacetylázy ze skupiny mastných kyselin s krátkým řetězcem. Exprese SERCA proteinu byla hodnocena pomocí metody Western blot za použití primárních monoklonálních protilátek IID8 a PLIM430, které rozpoznávájí enzymy SERCA2 a SERCA3. Naše experimenty ukazují, že exprese proteinů SERCA a proces buněčné diferenciace jsou vzájemně propojeny ve všech sledovaných buněčných liniích nádoru plic (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). Po navození buněčné diferenciace inhibitory histon deacetylázy jako jsou butyrát, valerát či fenylbutyrát sodný, byla pozorována především zvýšená exprese proteinu SERCA3. Zvýšení exprese proteinu SERCA3 bylo specifické, neboť úroveň exprese proteinu SERCA2 i po přidání léčiv zůstala nezměněna. Souhrnem lze říci, že naše výsledky potvrzují a rozšiřují původní hypotézu...

In the present work we investigated the process of cellular differentiation induced by histone deacetylase inhibitors in cell lines derived from various types of non- small cell lung cancer (NSCLC). Our objective was to study the cross-talk between the process of cellular differentiation and expression of Sarco-Endoplasmic Reticulum Calcium ATPases (SERCA proteins), enzymes that transport calcium from cytosol to the endoplasmic reticulum. Various lung cancer cell lines were grown in vitro, subjected to treatments by various short chain fatty acid-derived histone desacetylase inhibitors, and SERCA expression was determined in a semi-quantitative Western blot format using the IID8 and PLIM430 anti-SERCA monoclonal antibodies that recognise SERCA2 and SERCA3, respectively. Our experiments show that the expression of SERCA proteins and cellular differentiation are interconnected in all lung studied cancer cell lines (A549, Calu-3, ChaGoK-1, NCI-H292 and NCI-H460). In particular, the induction of the expression of SERCA3 protein was observed after the induction of cellular differentiation by histone deacetylase inhibitors such as sodium butyrate, valerate and phenylbutyrate. Induction of SERCA3 expression was specific, because SERCA2 levels were not modified by the treatments. Taken together, our...