HPLC analýza dexrazoxanu a jeho metabolitů

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je jednou z nejpoužívanějších separačních metod instrumentální analýzy umožňující zároveň jak kvalitativní tak kvantitativní analýzu látek. Anthracykliny jsou cytotoxická léčiva široce používaná v klinické praxi při léčbě hematologických malignit (leukémií, lymfomů) a solidních nádorů (žaludku, prsu a vaječníků). Léčba těmito léčivy však má svůj závažný limitující faktor. Tímto faktorem je anhracykliny indukovaná kardiotoxicita, která je způsobena hydroxylovými radikály a dalšími reaktivními formami kyslíku. V jejich tvorbě mají klíčovou úlohu komplexy anthracyklinů se železem. Dexrazoxan je derivát bisdioxopiperazinu, který se používá ke snížení kardiotoxického účinku anthracyklinů. Předpokládá se, že působí prostřednictvím svého aktivního metabolitu ADR-925, který působí jako chelátor vyvazující železo, a tak brání na železu závislé tvorbě kyslíkových radikálů. Tato práce se zabývá možnostmi analýzy dexrazoxanu a jeho rozkladných produktů/metabolitů na stacionární fázi Ascentis HILIC za podmínek kompatibilních s hmotnostní detekcí (MS). Nejlepších výsledků bylo dosaženo za podmínek izokratické eluce při použití mobilní fáze tvořené 5mM mravenčanem amonným o pH 5 nebo 7 a acetonitrilem v poměru 22:78 (v/v). Mobilní fáze protékala kolonou rychlostí 0,3...

High performance liquid chromatography (HPLC) is one of the most used separating methods of instrumental analysis enabling both qualitative and quantitative analysis of substances. Anthracyclines are cytotoxic drugs widely used in clinical practice for treatment of hematological malignancies (leucaemias, lymphoms) and solid tumours (stomach, breast, ovarian cancer). Treatment by these drugs has a serious limiting factor, however. This factor is an anthracycline induced cardiotoxicity, which is caused by hydroxyl radicals and other reactive oxygen forms. The main role in their formation play the complexes with iron. Dexrazoxane is a derivate of bisdioxopiperazine, which is used to reduce the cardiotoxic effect of anthracyclines. It is supposed that it takes effect by the means of its active metabolite ADR-925, which works as a substance chelating iron. This mechanism hinders the iron dependant formation of oxygen radicals. This thesis deals with analysis options of dexrazoxane and its hydrolysis products/metabolites on the stationary phase Ascentis HILIC in conditions compatible with mass spectrometric detection (MS). The best results were achieved in conditions of isocratic elution using mobile phases containing 5 mM ammonium formiate with pH 5 or 7 and acetonitrile in ratio 22:78 (v/v). Mobile...