Studie retenčního chování neopterinu v HILIC chromatografickém systému s různými typy stacionárních fází

Abstract

NÁZEV: Studie retenčního chování neopterinu v HILIC chromatografickém systému s různými typy stacionárních fází ABSTRAKT: Předmětem této diplomové práce je vývoj analytické metody určené k identifikaci a stanovení biologicky aktivních látek biopterinu, neopterinu a 7,8-dihydroneopterinu za použití metody chromatografie hydrofilních interakcí (HILIC) ve spojení s fluorescenční detekcí. Neopterin představuje důležitý a užitečný parametr monitorování aktivace imunitního systému, který doprovází řadu infekčních a autoimunitních onemocnění. Zvýšená hladina neopterinu se vyskytuje také u různých typů malignit. V poslední době je neopterin spolu s 7,8-dihydroneopterinem spojován s intracelulárním oxidativním stresem a apoptózou buněk. Plně redukovaná forma biopterinu se v lidském organismu uplatňuje jako kofaktor některých enzymů. HILIC je varianta vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Testovány byly tři chromatografické kolony (LUNA HILIC, OBELISK R, OBELISK N) za různých chromatografických podmínek. Mobilní fázi tvořila směs vodné (octanový pufr, kyselina octová, voda) a s vodou mísitelné organické složky (acetonitril). Chromatografická kolona OBELISK N poskytla při užití směsi acetonitrilu a 100mM octanového pufru o pH=4,8 chromatogram se zcela separovanými píky biopterinu a neopterinu, pík...

TITLE: The study of neopterin retention characteristics in HILIC chromatography system with different types of stacionary phases SUMMARY: This graduation thesis was dealing with the development of an analytical method for the identification and quantification of biologically active substances biopterin, neopterin and 7,8-dihydroneopterin by hydrophilic liquid interaction chromatography (HILIC) connected to fluorescence detection. Neopterin represents an important and useful parameter for monitoring of the immune system activation, that accompanies different infectious and autoimmune diseases. Increased level of neopterin concentration can be observed in several types of malignant tumors. Recently the coherency between neopterin, 7,8-dihydroneopterin and intracelular oxidative stress and apoptosis of the cells has been demonstrated. Totally reduced form of biopterin serves as a cofactor of some enzymes in human organism. HILIC is an option of high performance liquid chromatography (HPLC). Three chromatographic columns (LUNA HILIC, OBELISK R, OBELISK N) were tested at different chromatografic conditions. Mobile phase consisted of mixture of aqueous component (ammonium acetate buffer, acetic acid, water) and water miscible organic component (acetonitrile). The mixture of acetonitrile and 100mM ammonium acetate...