Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci inferferonu gama

Abstract

Autor: Bc. Jana Machovská Název: Vliv salmonelového lipopolysacharidu na genový přepis a sekreci interferonu gama Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd (KBLV) studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Cílem diplomové práce je posoudiv vliv typu salmonelového lipopolysacharidu na aktivaci genového přepisu a produkci interferonu gama (IFN-) jako ústředního cytokinu imunitní reakce proti intracelulárním bakteriálním patogenům. Studie byla provedena na infekčním modelu gnotobiotického prasete infikovaného gramnegativní bakterií Salmonella enterica serovar Typhimurium kmen LT2 nebo jejím rfaL- mutantem. Metody: 1) Vytvoření čtyř skupin selat: kontrolní bezmikrobní skupina (GF), skupina konvenčních selat a skupiny selat infikovaných kmenem LT2 a rfaL- 2) stanovení počtu CFU v krvi a výplachu tenkého střeva kultivací na bakteriologických půdách 3) Izolace celkové RNA z ilea, stanovení její koncentrace (spektrofotometricky) a odhad čistoty (A280/A260). 4) reverzní transkripce 5) kvantifikce specifické vzniklé cDNA (real-time PCR s LNA sondami) 6) normalizace a relativizace dat z real-time PCR 7) stanovení cytokinů jako proteinů v krvi a výplachu tenkého střeva metodou ELISA Výsledky: 1) Počet bakterií v tenkém...

Candidate: Bc. Jana Machovská Title of diploma thesis: Influence of salmonella lipopolysaccharide on gene transcription and secretion of interferon gamma Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biological and Medical Sciences Aim: The aim of this diploma thesis is to evaluate the influence of a type of salmonella lipopolysaccharide on the activation of gene transcription and production of gamma interferon (IFN-γ) as a key cytokine of immune response to intracellular bacterial pathogens. The study was performed on infectious model of a gnotobiotic pig infected with gram- negative bacteria Salmonella enterica serovar Typhimurium strain LT2 or its rfaL- mutant. Methods: 1) Four groups of piglets were created: germ-free as a control group, conventional piglets, piglets infected with LT2 strain, piglets infected with rfaL- mutant 2) Determination of bacterial CFU in blood and intestinal lavage by cultivation on bacteriological media 3) Isolation of a total RNA from ileum, spectrophotometric quantification and estimation of its purity (A280/A260) 4) Reverse transcription into cDNA 5) Real-time PCR with LNA probes 6) Normalization and relativization of real-time PCR data 7) Estimation of cytokines in blood and intestinal lavage by ELISA. Results: 1) A bacterial...