Detekce protilátek reagujících s F. tularensis v časné fázi infekce

Abstract

Kristina Straková Detekce protilátek reagujících s F. tularensis v časné fázi infekce Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové studijní obor farmacie Na základě vysoké virulence a mortality se Francisella tularensis řadí mezi vojensky a teroristicky zneužitelná etiologická agens a proto je vhodným předmětem základního výzkumu. Problematika protilátkové odpovědi organismu na infekci intracelulárních patogenů v současné době nabývá na významu. Názory a výsledky vědeckých skupin nejsou jednotné a jedná se tedy o aktuální téma. Cílem naší práce bylo zjistit, zda je F. tularensis schopná vyvolat protilátkovou odpověď již velmi časně po infekci a to do 48 hodin. Testován byl virulentní kmen F. tularensis. Zároveň jsme chtěli ověřit, zda je námi použitá metodika vhodně zvolená a poskytuje dostatečně reprodukovatelné výsledky. Metody: Připravili jsme celobuněčný lyzát F. tularensis holarctica FSC200, který jsme podrobili separaci pomocí 2D elektroforézy. Po Western blotu následovala imunodetekce s použitím sér myší BALB/c odebraných 24 a 48 hodin po infekci a kontrolních sér myší, které nebyly infikovány. Srovnávací analýzou jsme hledali proteiny, které reagují pouze s imunizovanými séry a nikoli s kontrolní skupinou. Výsledky: Realizovali jsme šest nezávislých...

Kristina Straková Detection of antibodies reactive with F. tularensis in early phase of infection Thesis Charles University in Prague, Faculty Of Pharmacy in Hradec Králové Study program Pharmacy Because of its high virulence and mortality Francisella tularensis is considered to be a dangerous potential biological weapon and therefore this etiological agent is a suitable object of the primary research. Problems of an antibody response to the infection with intracellular pathogens are currently gaining in importance. Opinions and conclusions of various research teams differ, so this topic is up-to-date. The aim of this study was to find whether F. tularensis induces the antibody immune reaction in an early phase of infection (after 24 and 48 hours). The virulent strain of F. tularensis was used. We also intended to validate a feasibility of chosen methodology. Methods: We prepared a whole-cell bacteria lysate of F. tularensis holarctica FSC200. This lysate was separated by 2D electrophoresis with subsequent Western blotting. Proteins were marked by immunodetection using serum of BALB/c mice. Mice sera were collected 24 and 48 hours post challenge with F. tularensis. The serum of uninfected mice was utilized as control. Using comparative analysis, we tried to find proteins reacting only with the...