Porovnání možností UV a CAD detekce u vybraných skupin látek

Abstract

Tato diplomová práce byla zaměřena na porovnání možností UV a CAD detekce u vysoko účinné kapalinové chromatografie. Separace estrogenních steroidů a fenolických kyselin byla provedena na koloně Zorbax SB C18 (50x 4,6 mm; 1,8 µm). Stanovení probíhalo za současného použití dvou typů detekce: ultrafialová detekce (UV) a detekce nabitého aerosolu (Charged aerosol detection; CAD). V rámci optimalizace metody byly zjišťovány vhodné podmínky pro stanovení estrogenních steroidů a fenolických kyselin, zejména se zaměřením na dobrou citlivost CAD detektoru. Byl sledován vliv složení a koncentrace vodné složky mobilní fáze, rychlosti průtoku mobilní fáze a nastavení rozsahu CAD na jeho odezvu. Ke stanovení estrogenních steroidů byla použita gradientová eluce. Mobilní fáze se skládala z 0,1% kyseliny octové a acetonitrilu. Ke stanovení fenolických kyselin byla použita gradientová eluce. Mobilní fáze se skládala z 0,5% kyseliny mravenčí a metanolu. Součástí této diplomové práce bylo ověření vhodnosti použití detektoru Corona CAD. Za optimalizovaných podmínek umožňuje CAD současnou detekci β - estradiolu a jeho pěti možných nečistot. Při současném stanovení deseti fenolických kyselin CAD detekce neposkytla relevantní výsledky pro nejdéle eluovanou kyselinu skořicovou. Metoda pro estrogenní steroidy byla...

This thesis was focused to a comparison of UV and CAD detection for High Liquid Performance Chromathography. The separation of estrogen steroids and phenolic acids was performed on Zorbax SB C18 (50x4,6 mm; 1,8 µm) analytical column. The determination was carried out using two type of detection: ultra - viollet detection (UV) and charged aerosol detection (CAD). The optimized conditions were carried out for determination of estrogen steroids and phenolic acids, especially it was focused on appropriate sensitivity of CAD. The effect of composition and concentration of aqueous part of mobile phase, flow rate of mobile phase and setting of CAD range to its response was monitored. The gradient elution was used for determination of estrogen steroids. The mobile phase was formed by 0,1% acetic acid and acetonitrile. The gradient elution was used for determination of phenolic acids. The mobile phase was formed by 0,5% formic acid and methanol. A part of this thesis was verification of Corona CAD detector applications. CAD enables simultaneous detection of β - estradiol and its five possible impurities at optimized conditions. Relevant results by CAD detection were not obtained in case of the latest eluted cinnamic acid in determination of ten phenolic acids. The method for estrogen steroids was validated...