Studium exprese SWC7 molekul na prasečích B lymfocytech

Abstract

2. SOUHRN Cílem této diplomové práce je objasnit profil exprese molekuly SWC7 na B buňkách a případně její úlohu ve vyzrávání B lymfocytů. Zrání prasečích B lymfocytů v periferii lze v současné době definovat na základě exprese povrchových molekul CD2 a CD21. Jako experimentální metoda sloužící pro zjištění fenotypu B lymfocytů nesoucích na svém povrchu molekulu SWC7 byla používána průtoková cytometrie. Měření schopnosti produkce protilátek bylo provedeno metodou ELISA. Při základní fenotypizaci bylo zjištěno, že molekula SWC7 se vyskytuje pouze na povrchu IgM+ a CD21+ B buněk, které mohou, ale nemusí, na svém povrchu nést molekulu CD2. Na základě tohoto zjištění byly na sortovacím průtokovém cytometru získány čisté subpopulace IgM+ CD21+ B buněk lišící se v expresi molekul SWC7 a CD2. Čisté subpopulace byly následně kultivovány a analyzovány pro zjištění změny fenotypu. Média ze sortovaných buněk byla odebírána a analyzována metodou ELISA na přítomnost prasečích protilátek IgM, IgG a IgA. Získané výsledky naznačují, že expresi molekul SWC7 na povrchu B buněk lze považovat za znak zrání, protože ztráta této molekuly z povrchu buněk je nevratná a protože pouze SWC7- B buňky jsou schopné produkovat protilátky typu IgM a IgG. Proces zrání prasečích B lymfocytů probíhá pravděpodobně tak, že nejprve dojde u CD2+...

The aim of this graduation thesis is to clarify the expression profile of the SWC7 molecule on B cells in swine and eventually to resolve its function during maturation. At present it is possible to define the maturation pathways of porcine B lymphocytes in the periphery on the base of the expression CD2 and CD21 cell surface molecules. The flow cytometry was chosen as a central experimental method for detection of B lymphocytes carrying SWC7 molecule on their surface. The ability of individual B cell subpopulation to produce antibodies was also measured by ELISA. Principal phenotype characterization showed that the SWC7 molecule is found only on the surface of IgM+ and CD21+ B cells. These may be CD2 positive or negative. Based on this finding, the individual subpopulations of IgM+ CD21+ B cells differing in expression of SWC7 and CD2 molecules were purified by flow cytometry. Subpopulations were thereafter cultivated and subsequently analyzed for alterations in their phenotype. Media from cultivated cells were also analyzed for presence of porcine IgM, IgG and IgA antibodies by ELISA. Results indicate that the expression of SWC7 molecule on the surface of B cells may be considered as a maturation marker because loss of SWC7 molecules from the cell surface is irreversible and because only SWC7- B cells are...