Analýza vybraných polárních látek v HILIC módu

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je v dnešní době nejvýznamnější a nejpoužívanější separační metoda, která umožňuje kvalitativní i kvantitativní analýzu směsi látek. Jednou z jejích variant je hydrofilní interakční kapalinová chromatografie. Tato technika zažívá v poslední době stále větší rozmach, hlavně díky svým přednostem, mezi než patří možnost analýzy velmi polárních a hydrofilních sloučenin. Přesně takovými sloučeninami jsou i adeninribonukleotidy (ATP, ADP, AMP, cAMP), kreatin a fosfokreatin. Význam těchto látek je obrovský a to nejen v lidském organismu. Bylo provedeno a publikováno mnoho metod stanovení těchto polárních látek, kde dominuje HPLC stanovení za použití kolon reverzní fáze. Jejich základní přehled je součástí této diplomové práce. V experimentální části tato diplomová práce popisuje postup vývoje vhodných chromatografických podmínek, které by umožnily separaci ATP, ADP, AMP, cAMP, kreatinu a fosfokreatinu a případně i jejich kvantitativní hodnocení v HILIC módu. Nejlepší separace bylo dosaženo na koloně ZIC®-HILIC (150 x 2,1 mm; 3,5 μm; 200 Å) s použitím dvousložkové mobilní fáze a gradientové eluce. Mobilní fáze se skládala ze složky A, kterou byl 2 mM mravenčanový pufr, pH 6,45 a složky B - směsi (90% acetonitril, 2 mM mravenčanový pufr). UV detekce byla prováděna při...

Nowadays High Pressure Liquid Chromatography is the most important and the most frequently used separation technique that enables qualitative and quantitative analysis of the complex mixtures. One of its variants is Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography. Lately this technique has experienced an increasing boom particularly, due to its ability to improve separation of very polar and hydrophilic compounds. The adeninribonucleotides (ATP, ADP, AMP, cAMP), creatine and phosphoceratine are among these highly polar compounds that are of great importance not only for human body. Number of analytical methods has been developed and published for the analysis of these compounds; however HPLC methods using the reverse phases have been dominated. The basic overview of these methods is a part of this diploma thesis. The experimental part of this thesis is focused on the development of chromatographic conditions suitable for the simultaneous analysis of ATP, ADP, AMP, cAMP, creatine and phosphocreatine in HILIC mode. The best separation was achieved on ZIC®-HILIC (150 x 2,1 mm; 3,5 μm; 200 Å) column using a binary mobile phase and gradient elution. The mobile phase consisted of the A component, (2 mM ammonium formate, pH 6,45) and the B component (90% of acetonitrile, 2 mM ammonioum formate) that were...