Monitorování kompenzace u pacientů s cystinurií spektrofotometrickou metodou

Abstract

Předložená bakalářská práce se zabývá problematikou cystinurie, dědičné metabolické poruchy transportu dibazických aminokyselin. Cílem práce bylo vybrat spektrofotometrickou metodu stanovení cystinu v moči, nalézt nejvhodnější podmínky pro stanovení cystinu v klinické laboratoři a aplikovat metodu na vzorky močí pacientů s cystinurií. Pro stanovení cystinu v moči byla zvolena metoda využívající barevný červenofialový produkt reakce cystinu po redukci na cystein s ninhydrinovým činidlem v kyselém prostředí. Byla změřena absorpční spektra standardu cystinu a moči pacienta s cystinurií s maximem při 560 nm. Byla vyloučena interference ornitinu a dalších aminokyselin. Byla proměřena kinetika redukce cystinu na cystein. Nejvhodnější dobou redukce je 5 minut, při delší době již dochází k oxidaci cysteinu na cystin. Byla proměřena kinetika tvorby barevného produktu. Maxima absorbance při zahřátí reakční směsi s ninhydrinem na 100 řC se dosáhlo po 10 minutách, dále již dochází k degradačním procesům a poklesu absorbance. Byla testována stabilita barevného produktu reakce na světle. Produkt je stabilní po dobu deseti minut, poté dochází k poklesu absorbance po 45 minutách o 8%. Byla ověřena linearita závislosti absorbance barevného produktu reakce na koncentraci cystinu v rozmezí 0 - 834 µmol/l. Byla testována...

The presented bachelor's thesis deals with the issue of cystinuria, hereditary metabolic disorder of transport of dibasic amino acids. The objective of the thesis was to select a spectrophotometric method of determining cystine in urine, to find the most suitable conditions for determining cystine in a clinical laboratory and to apply the method on samples of urine of patients with cystinuria. For determining cystine in urine, the method using coloured red and violet product of cystine reaction was selected after reduction to cystine with ninhydrin agent in acid environment. Absorption spectra of standard of cystine and urine in a patient with cystinuria were measured with the maximum at 560 nm. Interference of ornithine and other amino acids was excluded. Kinetics of reduction of cystine to cysteine was measured. The most suitable time of reduction is 5 minutes, in longer time cysteine is oxidized to cystine. Kinetics of creation of a coloured product was measured. The maximum absorption in heating the reaction mix with ninhydrin to 100řC was reached after 10 minutes, later only degradation processes and absorbance reduction takes place. Stability of a coloured product of reaction in light was tested. The product is stable for ten minutes, then absorbance drops by 8% after 45 minutes. Linearity of...