Vrozená hemochromatóza - význam molekulárně biologického vyšetření mutace S65C v genu HFE

Abstract

Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Daniela Putzová Školiteľ: Doc. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vrodená hemochromatóza - význam molekulárno biologického vyšetrenia mutácie S65C v géne HFE Cieľ práce: Cieľom diplomovej práce bolo zavedenie vyšetrovacej metódy PCR - RFLP pre stanovenie mutácie S65C v HFE géne, prostredníctvom ktorej by bolo možné vyšetrovať reálne klinické vzorky a zistiť výskyt S65C vo vyšetrovaných vzorkách. Metódy: V tejto práci bolo vyšetrených 140 pacientskych vzoriek (68 % (n = 95) od mužov, 32 % (n = 45) od žien ,vo veku 20 až 83 rokov) na prítomnosť mutácie S65C v HFE géne prostredníctvom metódy PCR - RFLP. Pre amplifikáciu požadovaných úsekov HFE génu boli využité primery ( 5'- ACA TGG TTA AGG CCT GTT GC - 3', 5'- GCC ACA TCT GGC TTG AAA TT - 3'). Pre restrikčnú analýzu bol použitý enzým HInfI. Výsledky: Alelová frekvencia mutácie S65C bola v súbore pacientov určená ako 1,8 %. U 5 vzoriek (3,6 %) bola detekovaná heterozygotná forma mutácie S65C, pričom z toho 2 vzorky (1,4 %) tvorili zložení heterozygoti C282Y/S65C. Závery: Pre vyšetrenie mutácie S65C v HFE géne sa podarilo zaviesť vyšetrovaciu metódu PCR - RFLP, prostredníctvom ktorej bolo umožnené obohatiť spektrum dosiaľ...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Daniela Putzová Supervisor: Doc. PharmDr. Martin Beránek, Ph.D. Title of diploma thesis: Hereditary hemochromatosis - Importance of molecular biology analysis of S65C mutation in HFE gene Background: The aim of this work was to establish an investigative method PCR-RFLP for the detection of the mutation S65C in HFE gene which can be used for an analysis of real clinical samples and for determination of their S65C mutation occurrence. Methods: In this study, 140 samples from patients were analyzed (68 % (n = 95) of samples from men, 32 % (n = 45) from women, in the age from 20 to 83 years) for the presence of the mutation S65C in HFE gene using PCR-RFLP method. For amplification of required segments of HFE gene, primers (5'- ACA TGG TTA AGG CCT GTT GC - 3', 5'- GCC ACA TCT GGC TTG AAA TT - 3') were used. The enzyme HInfI was used for the restriction analysis. Results: S65C mutation allelic frequency was determined as 1.8 % in this cohort of patients. Five patients (3.6 %) were heterozygous for the mutation S65C; two of them (1.4 %) were identified as C282Y/S65C compound heterozygotes. Conclusions: PCR - RFLP procedure was successfully established for the determination of S65C mutation...