Studium úlohy pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu při intoxikaci isoniazidem s využitím HPLC

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie patří v současné době mezi nejvíce využívané analytické metody ve všech oblastech analýzy léčiv. Umožňuje jak kvalitativní tak kvantitativní hodnocení. Isoniazid je užíván k léčbě a prevenci tuberkulózy. Patří mezi antituberkulotika první volby. Mezi nejzávažnější projevy toxicity v souvislosti s jeho podáváním patří neurotoxicita, která je spojena s nedostatkem vitamínu B6. Neurotoxicita pravděpodobně souvisí s tvorbou hydrazonových kondenzačních produktů isoniazidu a pyridoxinu - jako je pyridoxal isonikotinoyl hydrazonu (PIH). Konkrétní důkazy o probíhajících mechanismech a dějích týkajících se této problematiky nejsou dostupné. Cílem této práce bylo optimalizovat podmínky chromatografické separace 8 analytů (isoniazidu, acetylisoniazidu, pyridoxalu, pyridoxolu, pyridoxaminu, pyridoxal-5-fosfátu, PIHu a vnitřního standardu o-108). Následně byly potřeba optimalizovat podmínky úpravy vzorku plasmy precipitací. Pro chromatografickou analýzu byla zvolena chromatografická kolona LiChroCART 250 × 4 mm I.D.,náplň Lichrospher 100 RP-18, 5 µm, s předkolonou Purospher RP-18, 5µm. Jako mobilní fáze A byl použit vodný roztok NaH2PO4 (0,01 mol/l), s přídavkem EDTA (0,001 mol/l) a kyseliny heptansulfonové (0,005 mol/l) s upraveným pH mobilní fáze pomocí H3PO4 na hodnotu...

High-performance liquid chromatography belongs nowadays among the most frequently used analytical methods in all fields of the pharmaceutical analysis. It makes both qualitative and quantitative evaluation possible. Isoniazid is used for the treatment and prevention of tuberculosis. One of the most serious symptoms of toxicity is a neurotoxicity which is connected with the B6 deficiency. The neurotoxicity probably relates to the formation of condenzation products isoniazid and vitamins B6 - such as pyridoxal isonikotinoyl hydrazone (PIH). Concrete evidence of the ongoing mechanisms and actions concerning this problemsis remains still elusive. The aim of this thesis was the optimalisation of the chromatography conditions for the separation of 8 analytes (isoniazid, acetylisoniazid, pyridoxal, pyridoxol, pyridoxamine, pyridoxal-5-phosphate, PIH a the internal standard o- 108). Therafter, the isolation of these compounds from plasma samples using precipiation was optimized. The separation was performed on a LiChroCART 250 × 4 mm I.D., analytical column with Lichrospher 100 RP-18, 5 µm packing, protected with a Purospher RP-18, 5µm guard column. As the mobile phase A was used aqueous solution of NaH2PO4 (0,01 mol/l), with the addition of EDTA (0,001 mol/l) and heptansulphonic acid (0,005 mol/l) with...