Oxidační poškození proteinů

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jana Bártová Školitel: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Oxidační poškození proteinů Kyselina chlorná je silné oxidační činidlo, které využívají fagocytující buňky k usmrcení pohlcené bakterie. Pokud dojde k vylití obsahu fagocytu do okolí, může dojít k poškození okolních struktur včetně proteinů. Katechiny patří do skupiny flavonoidů, jejichž antioxidační vlastnosti byly demonstrovány v mnoha studiích. Moje diplomová práce byla zaměřená na potenciální vliv osmi přírodních derivátů katechinu na oxidační poškození lidského sérového albuminu (HSA) kyselinou chlornou. Použila jsem dvě spektrofotometrické (stanovení karbonylů a chloraminů) a tři elektroforetické metody (nativní PAGE, SDS-PAGE, imunoblotting). Při stanovení chloraminů jsem sledovala závislost účinku antioxidantu na jeho koncentraci (0-3 mM) a ze získaných dat jsem pomocí programu GraphPad Prism vypočítala hodnoty EC50 pro jednotlivé katechiny. Nejúčinnější sloučeninou byl katechin, jehož EC50 byla 4,8 µM. Z výsledků vyplývá, že antioxidační schopnost klesá s rostoucím počtem hydroxylových skupin v molekule flavonoidu. Karbonylové skupiny jsou vhodným markerem probíhající oxidace proteinu. Nejsilnější protektivní účinek...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Jana Bártová Supervisor: PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Title of diploma thesis: Oxidative damage to proteins Hypochlorous acid is a strong oxidant, which is used by phagocytic cells to kill ingested bacteria. Surrounding structures including proteins may be damaged in case the content of a phagocyte is spilled to the vicinity. Catechins belong to a group of flavonoids whose antioxidant properties were demonstrated in many studies. My diploma thesis was focused on a potential effect of eight naturally occurring derivatives of catechin towards oxidative damage of human serum albumin (HSA) by hypochlorous acid. I used two spectrophotometric (determination of carbonyl groups and chloramines) and three electrophoretic methods (native PAGE, SDS-PAGE, immunoblotting). Dependence of an antioxidant effect on its concentration (0-3 mM) was observed during determination of chloramines and obtained data were used for calculation of EC50 values of individual catechins using program GraphPad Prism. The most effective compound was catechin whose EC50 was 4.8 µM. Results suggest that antioxidant ability decreases with increasing number of hydroxyl groups in the molecule of flavonoid. Carbonyl groups are a...