Stanovení sibiromycinu metodou UHPLC

Abstract

Za účelem stanovení sibiromycinu ve fermentačním médiu Streptosporangium sibiricum byla vyvinuta nová analytická separační metoda s využitím ultraúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) s UV detekcí. Nově vyvinutý postup extrakce na tuhé fázi založený na kationtové výměně sloužil k prekoncentraci a přečištění fermentačního média obsahujícího sibiromycin před vlastní UHPLC analýzou. Metoda byla validována a byla prokázána linearita v koncentračním rozsahu 3,9-250,0 µg/ml s korelačním koeficientem 0,999 a výtěžností v rozmezí 71,66±3,55 % až 74,75±5,18 %. V rámci testování meze stanovitelnosti bylo dosaženo hodnoty 0,18 µg/ml s přesností vyjádřenou relativní směrodatnou odchylkou (RSD) 9,6 % a správností 97,6 %. Vyvinutá metoda pomohla ke zjištění vlivu 12 různých fermentačních médií na produkci sibiromycinu a navíc také dokázala tvorbu přírodních analogů sibiromycinu, jež byly charakterizovány pomocí hmotnostní spektrometrie.

A new separation and quantification method using ultra high-performance liquid chromatography (UHPLC) with UV detection was developed for the detection of sibiromycin in fermentation broth of Streptosporangium sibiricum. The solid phase extraction method based on cation-exchange was employed to pre-concentrate and purify fermentation broth containing sibiromycin prior to UHPLC analysis. The whole assay was validated and showed a linear range of detector response for the quantification of sibiromycin in a concentration from 3.9 to 250.0 µg/ml, with correlation coefficient of 0.999 and recoveries rating from 71.66±3.55 % to 74.75±5.18 %. Method limit of quantification of the assay was determined as 0.18 µg/ml and was verified with resulting RSD of 9.6 % and accuracy of 97.6 %. The developed assay was used to determine the sibiromycin production in 12 different fermentation broths. Moreover, several natural sibiromycin analogues/derivatives were described with pilot characterization using off-line mass spektrometry.