Stanovení adrenalinu a noradrenalinu v plazmě metodou HPLC

Abstract

Cílem této bakalářské práce bylo provést validaci metody na stanovení adrenalinu a noradrenalinu v plazmě pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s elektrochemickou (coulometrickou) detekcí. Metodu bylo potřeba nejprve optimalizovat pro coulometrickou detekci, neboť byl používán kit firmy Bio-Rad, který byl určen pro stanovení s amperometrickou detekcí. Principem této metody je chromatografická separace látek s následnou oxidací stanovovaných analytů při průchodu analytickou celou s coulometrickou detekcí. Součástí analytického postupu je extrakce adrenalinu a noradrenalinu na pevné fázi. V rámci této práce byla provedena optimalizace metody pro stanovení adrenalinu a noradrenalinu s coulometrickou detekcí. Na jednotlivých analytických celách bylo zvoleno následující nastavení potenciálů: na cele 1 byl nastaven potenciál 350 mV s rozsahem 100 nA, na cele 2 byl nastaven potenciál 0 mV s rozsahem 50 nA na a na guard cele 0 mV s rozsahem 50 nA. Dále byla chromatografická metoda plně validována (přesnost, správnost, mez detekce, robustnost). Na závěr bylo provedeno mezilaboratorní porovnání výsledků 42 pacientských vzorků s výsledky naměřenými v nemocnici Šternberk.

The target of this bacalary work was to validate the metod for determination of adrenaline and noradrenaline in plasma by high performance liquid chromatography with electrochemical (coulometric) detection. The metod was first necessary to optimize for the coulometric detection because it was used the Bio-Rad kit, which was designed to determine with amperometric detection. The principle of this metod is the chromatographic separation of substances with subsequent oxidation of the determined analyte passes through the analytic cell with coulometric detection. The part of the analytical procedure is the solid phase extraction. The part of this work was the optimization of the metod for the coulometric detector. For the analysis were selected following potentials: channel 1 - 350 mV with range 100 nA, channel 2 - 0 mV with range 50 nA, guard channel 0 mV with range 50 nA. Furthermore, the chromatographic metod was fully validated (accuracy, precision, limit of detection, robustness). In the conclusion was made interlaboratory comparison of results of 42 patients samples with those obtained in the hospital Šternberk.