HPLC analýza benzimidazolů s využitím core-shell kolon I

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Kandidát: Kateřina Oslejová Školitel: ing. Vladimír Kubíček, CSc. Název diplomové práce: HPLC analýza benzimidazolů s využitím core-shell kolon I Cílem této práce bylo převedení starší metody HPLC analýzy flubendazolu a jeho metabolitů, např. redukovaného flubendazolu, z klasické kolony C18 (250×3,0 mm; 5 µm) na kolonu Ascentis® Express C18 (10×3,0; 2,7 µm) a nalezení vhodných vnitřních standardů. Experimenty byly provedeny za použití kapalinového chromatografu Agilent 1200 Series® s DAD a fluorescenční detekcí. Flubendazol byl detekován DAD detektorem. Fluorescenčním detektorem byly detekovány nízké koncentrace redukovaného flubendazolu. Bylo vyzkoušeno několik složení mobilních fází. Mobilní fáze složená z fosfátového pufru (pH = 3,0; 0,025 mol/l) a acetonitrilu (70/30, v/v) byla vhodná pro studovanou separaci. V závislosti na druhu detekce byly využívané různé vnitřní standardy. Mebendazol sloužil jako vnitřní standard v případě DAD detekce, zatímco oxibendazol byl využit pro detekci fluorimetrickou. Navržená metoda byla úspěšně aplikována při analýze reálných vzorků.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of biophysics and physical chemistry Candidate: Kateřina Oslejová Supervisor: ing. Vladimír Kubíček, CSc. Title of diploma thesis: HPLC Analysis of Benzimidazoles Using Core-shell Columns I The aim of this work was to transfer the HPLC method of determination of flubendazole and its metabolite, i.e. reduced flubendazole, from a classical C18 column (250×3,0 mm; 5 µm) to core-shell column Ascentis® Express C18 (10×3,0; 2,7 µm) and to find a suitable internal standard. Experiments were performed using liquid chromatograph Agilent 1200 Series® with both DAD and fluorescence detection. Flubendazole was detected with the DAD detector. Low concentrations of reduced flubendazole were detected with the fluorimetric detector. Several mobile phase compositions were tested. The mobile phase consisting of phosphate buffer (pH = 3,0; 0,025 mol/l) and acetonitrile (70/30, v/v) appeared to be a good choice for the separation under study. Two internal standards were exploited for the quantification, depending on the detection principle. Mebendazole served as the internal standard in the case of DAD detection, while oxibendazole was utilized for fluorimetric detection. The proposed method was successfully applied for analyses of real samples.