Vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek v rostlinných extraktech čeledi Amaryllidaceae pomocí techniky UHPLC-MS/MS

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Hana Plečková Školitel: Doc. PharmDr. Lucie Nováková Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek v rostlinných extraktech čeledi Amaryllidaceae pomocí techniky UHPLC-MS/MS Cílem této diplomové práce je vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek z čeledi Amaryllidaceae v rostlinných extraktech s použitím propojení dvou metod UHPLC a MS/MS. Kombinace metod UHPLC a MS/MS umožňuje pracovat s velmi malými částicemi (< 2 µm), čímž je dosaženo rychlé separace s vysokou účinností a zkrácení doby analýzy. MS se používá k určování hmotnosti atomů, molekul, fragmentů, a to po převedení na ionty. Vývoj metody sloužil k výběru optimální stacionární a mobilní fáze, probíhal nejdříve na UHPLC s PDA detekcí. Byly testovány kolony: BEH PHENYL, BEH C18, BEH SHIELD RP18, HSS T3. Byly studovány možnosti separace a chování sledovaných látek při změnách pH (3 a 9), doby retence, průtokové rychlosti. Nejlepší výsledky z těchto kolon vykazovala kolona BEH SHIELD R18, za použití mobilní fáze methanolu a pufru pH 3, a dále průtokové rychlosti 0,4 ml/min. Později byla představena nová stacionární fáze CSH (charged surface hybrid, hybridní povrchově nabitá) na bázi mixed-mode sorbentů,...

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Hana Plečková Supervisor: Doc. PharmDr. Lucie Nováková Ph.D. Title of Doctoral Thesis: Development of method for the identification of alkaloids in plant extracts from Amaryllidaceae using UHPLC-MS/MS. The purpose of this thesis is the development of method for identification of alkaloids from the family Amaryllidaceae in plant extracts using coupling of two methods UHPLC and MS/MS. The combination of methods UHPLC and MS/MS enables to work with the very small particles (< 2 µm) thereby fast separation with high efficiency and reduction of analysis time is achieved. MS is used for determination of atomic weight, molecular weight after the ionization of neutral species. The development of methods was first conducted on UHPLC with PDA detection which served for the choice of optimal stationary and mobile phase. The tested columns were following: BEH PHENYL, BEH C18, BEH SHIELD RP18, HSS T3. The possibilities of separation and the behavior of the monitored substances at different pH (3 and 9), retention time and flow rate were studied. The column BEH SHIELD RP18 provided the best results of these columns, using buffer pH 3 and methanol as an organic modifier, and then flow rate 0.4 ml/min....