Detekce a klonogenní analýza nádorových kmenových buněk pomocí průtokové cytometrie

Abstract

V předkládané práci byla zavedena nová metoda určování klonogenní účinnosti nádorových kmenových buněk pomocí vysokorychlostního separátoru buněk. Výsev buněk na mikrotitrační desky byl prováděn pomocí metody průtokové cytometrie v kombinaci s vysokorychlostní separací. V první části práce byla nová metoda zavedena a testována na vybraných buněčných liniích. Získané výsledky byly srovnávány s metodou, která je založena na principu klonování buněk limitním ředěním u čtyř buněčných linií. V druhé části práce byla metoda prakticky aplikována na srovnání klonogenní kapacity dvou subpopulací buněčné linie cE2 definovaných na základě exprese charakteristických znaků nádorových kmenových buněk - CD44 a CD133. Novou metodu lze na základě této práce zavést jako ověřený postup při určování klonogenní kapacity nádorových a nádorových kmenových buněk i na jiných pracovištích, které disponují obdobným přístrojovým vybavením.

The Diploma Thesis deals with an implementation of the new method for an assessment of a cloning efficiency of the cancer stem cells separated by a high speed cell sorter. The cell-sowing on the microtitration plates was performed by the flow cytometry method in a combination with the high speed cell sorter. In the first part of the Diploma Thesis the new method was introduced and tested on the selected cell lines. The obtained results were compared with the results of the limiting dilution assay within four cell lines. As for the second part of my Diploma Thesis, the method was practically applied to analysis of the cloning capacity of two subpopulations of cE2 cells based on the expressions of characteristic markers of stem and cancer stem cells - CD44 and CD 133. Based on the findings, the new method can be introduced as an approved proceeding for the cloning capacity assessment of cancer stem cells in other workplaces that possess analogical device equipment.