Optimalizace preparativní LC-MS metody frakcionace oligosacharidů hyaluronanu

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra fyziky a fyzikální chemie Kandidát: Bc. Martina Dvořáková Školitel: Doc. Ing. Alice Lázníčková, CSc. Konzultant: Mgr. Martina Hermannová, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace preparativní LC-MS metody frakcionace oligosacharidů hyaluronanu Tato diplomová práce se zabývá optimalizací LC-MS analýzy oligosacharidů hyaluronanu v preparativním módu. Teoretická část stručně shrnuje dostupné informace o biologických a chemických vlastnostech kyseliny hyaluronové. Kyselina hyaluronová je snadno enzymaticky degradovatelná prostřednictvím savčích hyaluronidáz za vzniku oligosacharidů hyaluronanu, které mohou být biologicky aktivní v závislosti na jejich molekulové hmotnosti. K separaci a purifikaci oligosacharidů hyaluronanu se nejčastěji využívá vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Nové analytické metody založené na kombinaci separačních technik s hmotnostní spektrometrií umožňují snadnou a velmi citlivou identifikaci složitých oligosacharidových směsí. V experimentální části jsme se zabývali optimalizací podmínek ionizace oligosacharidů hyaluronanu v negativním a pozitivním módu. Nejprve jsme se zaměřili na nastavení napětí na kapiláře, napětí na sample cone, desolvatační teploty, průtoku desolvatačního plynu a průtoku cone...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biophysic and Physical Chemistry Candidate: Bc. Martina Dvořáková Supervisor: Doc. Ing. Alice Lázníčková, CSc. Consultant: Mgr. Martina Hermannová, Ph.D. Title of diploma thesis: Optimization of preparative LC-MS method for fractionation of oligosaccharides of hyaluronanu This diploma thesis deals with optimization of LC-MS method for analysis of hyaluronan oligosaccharides in preparative mode. The theoretical part summarizes available information about biological and chemical properties of hyaluronic acid. Hyaluronic acid is easily enzymatically degradable by mammalian hyaluronidases that produce hyaluronan oligosaccharides. The biological function of these degradation products depend on their molecular weight. High-performance liquid chromatography is mainly used for separation and purification of hyaluronan oligosaccharides. A new method for the determination of hyaluronan oligosaccharides is based on a combination of separation techniques and mass spectrometry. The experimental part deals with optimization of ionisation conditions for electrospray ionization mass spectrometry in positive and negative ion mode. In the first step, we focused on setting of capillary voltage, cone voltage, desolvation temperature, flow...