Sekvenční injekční chromatografie-testování a srovnání moderních chromatografických kolon

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Bc. Petra Molnárová Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, PhD. Název diplomové práce: Sekvenční injekční chromatografie - testování a srovnání moderních chromatografických kolon Tato diplomová práce se zabývá porovnáváním dvou chromatografických kolon pro separaci vybraných vitamínů B (thiaminu, nikotinamidu, pyridoxinu, riboflavinu a kyseliny listové) a vitamínu C v systému Sekvenční injekční chromatografie. Vyvíjená metoda využívala UV detekci při 220, 272 a 290nm. Byla testována kolona Ascentis Express HILIC (3 cm x 4,6 mm, 2,7 µm) s použitím mobilní fáze z acetonitrilu a octanu amonného. Na této koloně nebyla vyvinuta taková metoda, která by umožnila odseparovat všech 6 vitamínů. Látky byly eluovány v nízkých retenčních časech a s nízkým rozlišením. Na koloně Ascentis Express RP-Amide (3 cm x 4,6 mm, 2,7 µm) byla vyvinuta metoda za použití gradientové eluce, která umožnila rozdělit všechny látky. Mobilní fáze byla složena s acetonitrilu a kyseliny fosforečné o pH 1,8. Byla provedena kalibrace, opakovatelnost a výtěžnost, avšak tato metoda nevykazovala takovou účinnost, aby mohla být validována. Pro výtěžnost byl jako srovnávací vzorek použit energetický nápoj SHOCK! obsahující dané vitamíny.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Deparment of Analytical chemismy Candidate: Bc. Petra Molnárová Supervisor: PharmDr. Petr Chocholouš, PhD. Title of diploma thesis: Sequential injection chromatogramy - testing and comparison of modern chromatographic columns This diploma thesis deals with testing and comparison of two modern chromatoghraphic columns in Sequential injection chromatography system. They were used for separation of selected vitamins B (thiamine, nikotinamide, pyridoxine, riboflavin and folic acid) and vitamin C. Developed method was based on UV detection at 220, 272 and 290nm. The Ascentis Express HILIC column (3 cm x 4.6 mm, 2.7 µm) was tested by using acetonitrile with ammonium acetate as a mobile phase. The method was not siccessfully developed because of low retention times of vitamins. The separation of six vitamins was not able, because of low selectivity. There was developed a method with use of Ascentis Express RP- Amide column (3 cm x 4.6 mm, 2.7 µm) using gradient elution, which was able to separate all 6 vitamins. Acetonitrile and phosphoric acid (pH 1.8) were components of the mobile phases. There was made calibration, reproducibility and recovery tests, but there was not good results enough to validate the method. For recovery was used...