Vývoj metody pro stanovení entekaviru v biologických materiálech s využitím UHPLC MS/MS

Abstract

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Tomáš Gottvald Supervisor: Doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of thesis: Development of method for the determination of entecavir in biological materials using UHPLC-MS/MS Entecavir is a synthetic guanosine nucleoside that plays an important role in treatment of chronical hepatitis B virus infection. This work was focused on development of highly sensitive method to determine entecavir concentrations in rat urine by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Entecavir C2 13 N15 , stable isotopically labeled internal standard, was used for quantitation. Hydrophilic interaction chromatography seems to be a suitable technique for retention and separation of polar compounds present in analyzed sample. One of the main goals was to confirm this fact by comparison with commonly used reverse phase chromatography mode (RP-UHPLC) on BEH C18 stationary phase. Conditions for RP-UHPLC were optimized as follows: mobile phase composed of acetonitrile/0.01 % formic acid (4:96). The HILIC conditions on BEH Amide stationary phase were optimized using isocratic elution with mobile phase composed of acetonitrile/5 mM ammonium acetate pH 4.0 (75:25). HILIC method provided much...

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Tomáš Gottvald Školitel: Doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro stanovení entekaviru v biologických materiálech s využitím UHPLC-MS/MS Entekavir je syntetický analog guanosinového nukleosidu, který hraje významnou roli v léčbě virové infekce chronické hepatitidy B. Tato práce byla zaměřena na vývoj vysoce citlivé metody pro stanovení koncentrace entekaviru v biologickém materiálu (potkaní moči) pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií. Při analýze byl použit stabilní izotopicky značený vnitřní standard, entekavir C2 13 N15 . Vzhledem ke struktuře analyzované molekuly bylo vhodné k analýze využít hydrofilní interakční chromatografii (HILIC). Jedním z hlavních úkolů bylo potvrdit tento fakt porovnáním s běžně používanou chromatografií na reverzních fázích (RP-UHPLC) na koloně Acquity BEH C18. Mobilní fáze pro reverzní chromatografii byla optimalizována na složení: acetonitril/0,01% kyselina mravenčí v poměru 4 : 96. HILIC separace byla provedena na koloně Acquity BEH Amide za použití izokratické eluce a složení mobilní fáze acetonitril/5 mM octan amonný pH 4,0 (75 : 25). Ve výsledku HILIC poskytovala lepší výsledky, pokud...