Využití proteomické analýzy pro identifikaci potenciálních biomarkerů u onemocnění kardiovaskulárního systému

Abstract

Hypertrophic cardiomyopathy is one of the most common inherited diseases of the cardiovascular system. Although this disease is known for a long time, a suitable diagnostic procedure uncovering its early stages in patients with negative or unknown family history is still lacking. A development of the method for targeted proteomic analysis in combination with subsequent quantification of chosen hypothetical markers of hypertrophic cardiomyopathy was the main aim of this thesis. This method is able to detect very small amounts of chosen markers in the minimum amount of complex biological material. Moreover, in combination with properly used standards, targeted proteomic analysis enables quite precise quantification of many analytes in a relatively short time. Several previously described protein markers of hypertrophic cardiomyopathy were assayed and quantified using unique proteomic technique. Concurrently, a new potential protein marker - soluble fibronectin - was described. Protein concentrations were validated using enzymoimmunoanalytical method and obtained results were compared with targeted proteomic analysis findings. In the presented thesis, a new short method was developed for detection and quantification of potential markers of hypertrophic cardiomyopathy. The main objectives of this...

SOUHRN Hypertrofická kardiomyopatie se řadí mezi nejčastější geneticky podmíněná onemocnění kardiovaskulárního systému. Ačkoliv je toto onemocnění známé dlouhou dobu, zatím neexistují snadno použitelné diagnostické postupy, které by odhalily chorobu v raných stádiích, což je zásadní zejména u jedinců s negativní nebo neznámou rodinnou anamnézou. Tvorba metody cílené proteomické analýzy spolu s kvantifikací vybraných potenciálních markerů hypertrofické kardiomyopatie pomocí izotopicky značených standardů byla hlavním cílem předkládané dizertační práce. Touto metodou lze odhalit již velmi malá množství hledaných potenciálních markerů v minimálním množství biologického materiálu. V kombinaci s vhodně použitými standardy navíc umožňuje přesnou kvantifikaci velkého počtu analytů v relativně krátkém čase. Pomocí cíleného proteomického přístupu bylo kvantifikováno několik proteinových markerů hypertrofické kardiomyopatie, které byly již dříve uvedeny v literatuře. Zároveň byl v rámci dizertační práce popsán plazmatický fibronektin jako nový potenciální marker tohoto onemocnění. Koncentrace několika vybraných proteinů byly závěrem stanoveny pomocí enzymoimunoanalytické metody a porovnány s výsledky cílené proteomické analýzy. V rámci předkládané dizertační práce byla vytvořena a ověřena metoda cílené proteomické...