Využití separačních metod v klinickém výzkumu

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Markéta Drastíková (roz. Kašparová) Školitel: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Název disertační práce: Využití separačních metod v klinickém výzkumu Předkládaná práce se zabývá vývojem a validací chromatografického stanovení liposolubilních vitamínů a optimalizací vhodných postupů přípravy biologického materiálu. V první části je řešena problematika stanovení vitamínů D, A a E v séru. Pro separaci analytů byly vyvinuty postupně dvě metody. 1) Separace na monolitních kolonách - byly použity dvě sériově zapojené monolitní kolony Chromolith Performance RP-18e, 100×4,6 mm a SpeedRod RP-18e, 50×4,6 mm. Vitamíny 1,25(OH)2D3, 25(OH)D3, retinol, tokol (vnitřní standard), cholekalciferol, ergokalciferol a α-tokoferol byly separovány během 6,5 minuty. Extrémně rychlá změna složení i průtoku mobilní fáze byla zajištěna skokovým gradientem. Takto byla maximálně využita velmi rychlá ekvilibrace monolitních kolon. 2) Separace na koloně s částicemi s pevným jádrem - kolona Ascentis Express RP-Amide 75×3,0 mm. Pro rychlou separaci byla použita gradientová eluce. Stanovení retinolu, 25(OH)D2, 25(OH)D3, tokolu (vnitřní standard) a α-tokoferolu po optimalizaci separace nečistot přítomných ve vzorku trvalo 8,5...

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Markéta Drastíková (maiden name Kašparová) Supervisor: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Title of Doctoral Thesis: Using of separation methods for clinical research This doctoral thesis deals with development and validation of a chromatographic determination of liposoluble vitamins and with optimization of biological materials preparation. The first part of this work is focused on vitamins D, A and E assessment in serum. To separate studied analytes two different methods were developed successively. 1) Separation employing monolithic columns - two different monolithic columns Chromolith Performance RP-18e, 100×4.6 mm and SpeedRod RP-18e, 50×4.6 mm were connected in series. Vitamins 1,25(OH)2D3, 25(OH)D3, retinol, tocol (internal standard), cholecalciferol, ergocalciferol and α-tocopherol were separated within 6.5 minutes using step gradient elution. 2) Separation exploiting a core-shell column - Ascentis Express RP-Amide 75×3.0 mm. To decrease the separation time a linear gradient was employed. The determination of 25(OH)D2, 25(OH)D3, tocol (internal standard) α-tocopherol took 8.5 minutes within separation of impurities. Developed solid phase (SPE) and liquid-liquid extraction (LLE)...