Vazebné vlastnosti enzymů purinnukleosidfosforylasa a thymidinfosforylasa

Abstract

5. CONCLUSION In this study, the ligand binding properties of two enzymes - purine nucleoside phosphorylase and thymidine phosphorylase - were tested, exploiting a method of surface plasmon resonance in Biacore X instrument. PNP is a ubiquitous enzyme playing a key role in the purine salvage pathway and TP plays an important role in human organism too, especially in pathological processes like inflammation or cancer. Both of enzymes are potential tools for the enzymatic synthesis of nucleoside analogues, which may possibly be used as antiviral or anticancer agents and that are difficult to prepare by chemical synthesis, or are obtained in a low yields. Use of Biacore X instrument helps to reveal how the enzymes interact with their natural substrates or derivatives. This work was focused on searching for the most suitable conditions, at first for immobilizing procedure (coating the surface of the sensor chip with PNP and TP enzyme) and then for interaction analysis between the enzymes and their natural substrates. The present results can be used as starting point for additional investigations of interaction analyses between enzymes and semi-synthetic analogues or they can also contribute to optimize conditions of producing such compounds by biocatalysis. In particular, the use of enzymes as biocatalysts...

7. SUMMARY IN CZECH (SOUHRN PRÁCE) Tato práce se zabývá zkoumáním vazebných vlastností a interakcí u enzymů purinnukleosidfosforylasa a thymidinfosforylasa s jejich přirozenými substráty s využitím metody SPR analýzy v přístroji Biacore X. Cílem práce bylo nejprve zjistit, zda a jak mohou být enzymy, připravené technologií rekombinantní DNA, ukotveny na povrch analytického čipu CM 5 s volnými karboxylovými skupinami. Poté bylo testováno, jakým způsobem a za jakých podmínek se již ukotvené enzymy vážou se svými přirozenými substráty. Měnícími se podmínkami byly druh pufru, jeho pH a molalita, teplota v systému a průtoková rychlost celou. Jako přirozené substráty pro enzym PNP byly použity guanosin ve směru rozkladné reakce a guanin s ribóza-1-fosfát nebo s deoxyribóza-1-fosfát ve směru syntézy. Pro enzym TP, který byl studován pouze ve směru fosforolýzy, byly jako přirozené substráty použity thymidin, uridin, a deoxyuridin. V závěru byla opakována interakční analýza k ověření stability čipu pokrytého TP enzymem, který byl uskladněn v lednici po dobu 10 týdnů. Přístroj Biacore X je založen na metodě SPR analýzy. Surface plasmon resonance neboli povrchová plasmonová rezonance je neinvazivní optická metoda sloužící ke sledování interakcí mezi biomolekulami a jejich ligandy. Odpověď nezávisí na povaze...